在高效液相分析檢測樣品的過程中，色譜柱會受到來自于樣品及色譜系統(tǒng)的污染，從而導致色譜柱耐用性差、壽命縮短。

　　來自于色譜系統(tǒng)的污染主要指，HPLC儀器系統(tǒng)中部件磨損而產(chǎn)生的固體顆粒，以及流動相系統(tǒng)過濾不*殘留的固體顆粒。來自于樣品的污染主要指，未*溶解的樣品或者已*溶解的樣品進入色譜系統(tǒng)中，由于樣品溶劑和流動相溶劑對樣品溶解存在的溶解度差異，導致沉淀析出污染系統(tǒng)。特別是對于中藥、天然產(chǎn)物、合成中間體及生物藥品的檢測，因基質(zhì)的復雜性，色譜柱受污染的情況會更加嚴重。污染會導致色譜系統(tǒng)壓力升高、色譜柱塌陷、填料變色等，從而帶來檢測成本高，測試結(jié)果不準確等各種影響。

　　圖：系統(tǒng)壓力升高或樣品基質(zhì)復雜導致分析柱污染

　　保護柱是液相色譜分析中重要的色譜耗材，使用保護柱可大大降低分析柱受污染的程度，延長分析柱使用壽命。

　　保護柱位于進樣器與分析柱之間，作用主要兩方面：

　　1.截留不溶性顆粒2.吸附樣品基質(zhì)中的雜質(zhì)

　　以下幾種情況建議使用保護柱：

　　1.中藥、天然產(chǎn)物及合成中間體等基質(zhì)較復雜的樣品分析——因溶解性差異導致樣品析出而污染分析柱的情況比較嚴重，梯度洗脫時影響更大。

　　2.生物樣品分析——因樣品的不可逆吸附導致的污染，保護柱可先于分析柱承受這種污染，從而延長分析柱壽命。

　　保護柱很重要，但選擇合適的保護柱更重要，選擇或使用不當也可能帶來截然相反的效果。

　　保護柱分類及選擇：

　　從材質(zhì)上分：不銹鋼材質(zhì)和PEEK(聚醚醚酮)材質(zhì)

　　PEEK材質(zhì)優(yōu)缺點——樣品對金屬離子比較敏感時，選擇PEEK材質(zhì)比較合適，比如某些蛋白分析會用到PEEK材質(zhì)的分析柱，主要就是考慮到這方面的因素;

　　不銹鋼材質(zhì)優(yōu)缺點——大部分小分子化合物的分析，選擇不銹鋼材質(zhì)保護柱居多，特別是當流動相體系使用到DMSO等一些溶解性較強的溶劑時，必須選擇不銹鋼材質(zhì)，甚至對于HPLC系統(tǒng)的管路也需要替換成不銹鋼材質(zhì)，因THF對于PEEK管路有相當強的腐蝕作用。

　　從結(jié)構(gòu)上分：卡套式(柱芯+柱套)和直接填裝短柱

　　直接填裝短柱優(yōu)缺點——這種結(jié)構(gòu)的保護柱實質(zhì)就是短的色譜柱，一般填裝的填料跟分析柱填料*一樣。生物樣品分析中，用這種類型保護柱居多，除可過濾一些不溶顆粒外，還可除去一些在分析柱上易吸附的雜質(zhì)。缺點是，一次性使用，污染嚴重時，只能報廢。

　　卡套式保護柱優(yōu)缺點——卡套式保護柱的柱套可反復使用，柱芯污染后可替換，廠家會提供配套的保護柱芯，但購買時需要注意，柱芯中有與分析柱匹配的填料，需要確認柱芯中的填料類型再購買。同時，柱芯和柱套需是來源于同一廠家的同一規(guī)格，否則，會存在匹配上的差異，導致峰型異常或者漏液。

　　從連接方式上分：獨立式和直連式

　　獨立式保護柱優(yōu)缺點——保護柱和分析柱之間用一段管路連接，不用擔心與分析柱在連接上的匹配問題。但使用管路連接時，連接不當容易產(chǎn)生死體積。

　　直連式保護柱優(yōu)缺點——保護柱接口帶螺紋，可直接與分析柱連接，死體積小，UPLC分析時建議選擇直連式保護柱;缺點：購買時需保證接口與分析柱匹配。

　　保護柱選擇考慮以下幾方面因素：

　　1.除非特殊情況，一般選擇填料基質(zhì)與分析柱基質(zhì)*相同的保護柱。

　　2.選擇保護柱尺寸可按柱體積計算，保護柱體積按分析柱體積的5%~10%即可;如4.6*250mm的分析柱體積約為4mL，保護柱體積可選擇在0.2~0.4mL之間為宜。同時，保護柱內(nèi)徑應與分析柱內(nèi)徑相同或相當。