在高效液相分析檢測樣品的過程中,色譜柱會受到來自于樣品及色譜系統(tǒng)的污染,從而導致色譜柱耐用性差、壽命縮短。
來自于色譜系統(tǒng)的污染主要指,HPLC儀器系統(tǒng)中部件磨損而產(chǎn)生的固體顆粒,以及流動相系統(tǒng)過濾不*殘留的固體顆粒。來自于樣品的污染主要指,未*溶解的樣品或者已*溶解的樣品進入色譜系統(tǒng)中,由于樣品溶劑和流動相溶劑對樣品溶解存在的溶解度差異,導致沉淀析出污染系統(tǒng)。特別是對于中藥、天然產(chǎn)物、合成中間體及生物藥品的檢測,因基質(zhì)的復雜性,色譜柱受污染的情況會更加嚴重。污染會導致色譜系統(tǒng)壓力升高、色譜柱塌陷、填料變色等,從而帶來檢測成本高,測試結(jié)果不準確等各種影響。
圖:系統(tǒng)壓力升高或樣品基質(zhì)復雜導致分析柱污染
保護柱是液相色譜分析中重要的色譜耗材,使用保護柱可大大降低分析柱受污染的程度,延長分析柱使用壽命。
保護柱位于進樣器與分析柱之間,作用主要兩方面:
1.截留不溶性顆粒2.吸附樣品基質(zhì)中的雜質(zhì)
以下幾種情況建議使用保護柱:
1.中藥、天然產(chǎn)物及合成中間體等基質(zhì)較復雜的樣品分析——因溶解性差異導致樣品析出而污染分析柱的情況比較嚴重,梯度洗脫時影響更大。
2.生物樣品分析——因樣品的不可逆吸附導致的污染,保護柱可先于分析柱承受這種污染,從而延長分析柱壽命。
保護柱很重要,但選擇合適的保護柱更重要,選擇或使用不當也可能帶來截然相反的效果。
保護柱分類及選擇:
從材質(zhì)上分:不銹鋼材質(zhì)和PEEK(聚醚醚酮)材質(zhì)
PEEK材質(zhì)優(yōu)缺點——樣品對金屬離子比較敏感時,選擇PEEK材質(zhì)比較合適,比如某些蛋白分析會用到PEEK材質(zhì)的分析柱,主要就是考慮到這方面的因素;
不銹鋼材質(zhì)優(yōu)缺點——大部分小分子化合物的分析,選擇不銹鋼材質(zhì)保護柱居多,特別是當流動相體系使用到DMSO等一些溶解性較強的溶劑時,必須選擇不銹鋼材質(zhì),甚至對于HPLC系統(tǒng)的管路也需要替換成不銹鋼材質(zhì),因THF對于PEEK管路有相當強的腐蝕作用。
從結(jié)構(gòu)上分:卡套式(柱芯+柱套)和直接填裝短柱
直接填裝短柱優(yōu)缺點——這種結(jié)構(gòu)的保護柱實質(zhì)就是短的色譜柱,一般填裝的填料跟分析柱填料*一樣。生物樣品分析中,用這種類型保護柱居多,除可過濾一些不溶顆粒外,還可除去一些在分析柱上易吸附的雜質(zhì)。缺點是,一次性使用,污染嚴重時,只能報廢。
卡套式保護柱優(yōu)缺點——卡套式保護柱的柱套可反復使用,柱芯污染后可替換,廠家會提供配套的保護柱芯,但購買時需要注意,柱芯中有與分析柱匹配的填料,需要確認柱芯中的填料類型再購買。同時,柱芯和柱套需是來源于同一廠家的同一規(guī)格,否則,會存在匹配上的差異,導致峰型異常或者漏液。
從連接方式上分:獨立式和直連式
獨立式保護柱優(yōu)缺點——保護柱和分析柱之間用一段管路連接,不用擔心與分析柱在連接上的匹配問題。但使用管路連接時,連接不當容易產(chǎn)生死體積。
直連式保護柱優(yōu)缺點——保護柱接口帶螺紋,可直接與分析柱連接,死體積小,UPLC分析時建議選擇直連式保護柱;缺點:購買時需保證接口與分析柱匹配。
保護柱選擇考慮以下幾方面因素:
1.除非特殊情況,一般選擇填料基質(zhì)與分析柱基質(zhì)*相同的保護柱。
2.選擇保護柱尺寸可按柱體積計算,保護柱體積按分析柱體積的5%~10%即可;如4.6*250mm的分析柱體積約為4mL,保護柱體積可選擇在0.2~0.4mL之間為宜。同時,保護柱內(nèi)徑應與分析柱內(nèi)徑相同或相當。
相關(guān)產(chǎn)品
免責聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權(quán)行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時,必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負版權(quán)等法律責任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。