技術(shù)服務(wù)介紹
細胞克隆形成率即細胞接種存活率,表示接種細胞后貼壁的細胞成活并形成克隆的數(shù)量。貼壁后的細胞不一定每個都能增殖和形成克隆,而形成克隆的細胞必為貼壁和有增殖活力的細胞。克隆形成率反映細胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀。
實驗基本步驟
A、取對數(shù)生長期的各組細胞,分別用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成單個細胞,并把細胞懸浮在10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中備用。
B、將細胞懸液作梯度倍數(shù)稀釋,每組細胞分別以每皿50、100、200個細胞的梯度密度分別接種含10mL 37℃預(yù)溫培養(yǎng)液的皿中,并輕輕轉(zhuǎn)動,使細胞分散均勻。置37℃ 5% CO2及飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2~3周。
C、經(jīng)常觀察,當(dāng)培養(yǎng)皿中出現(xiàn)肉眼可見的克隆時,終止培養(yǎng)。棄去上清液,用PBS小心浸洗2次。加4%多聚甲醛固定細胞5mL固定15分鐘。然后去固定液,加適量GIMSA應(yīng)用染色液染10~30分鐘,然后用流水緩慢洗去染色液,空氣干燥。
D、將平皿倒置并疊加一張帶網(wǎng)格的透明膠片,用肉眼直接計數(shù)克隆,或在顯微鏡(低倍鏡)計數(shù)大于10個細胞的克隆數(shù)。后計算克隆形成率??寺⌒纬陕?=(克隆數(shù)/接種細胞數(shù))×100%
平板克隆形成試驗方法簡單,適用于貼壁生長的細胞。適宜底物為玻璃的、塑料瓶皿。試驗成功的關(guān)鍵是細胞懸液的制備和接種密度。細胞一定要分散得好,不能有細胞團,接種密度不能過大。
實驗結(jié)果展示
客戶需知
1)、客戶需提供生長狀態(tài)良好的實驗細胞及細胞培養(yǎng)條件;
2)、客戶需準(zhǔn)確告知實驗設(shè)計內(nèi)容,如樣本濃度等,并提供實驗所需因子等。
實驗周期
15個工作日(具體實驗周期視實驗設(shè)計方案而異)
收費標(biāo)準(zhǔn)
歡迎咨詢創(chuàng)凌生物!
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時,必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。