對于色譜柱，您了解多少？

來源：上海推勤實(shí)業(yè)有限公司 2019年12月26日 22:51

　　對于色譜柱，您了解多少？

　　一、色譜柱的平衡

　　色譜柱由工廠測試后是保存在乙腈/水中的。新柱應(yīng)先使用10-20倍柱體積的甲醇或乙腈沖洗色譜柱。請一定確保您分析樣品所使用的流動(dòng)相和乙腈/水互溶。

　　每天用足夠的時(shí)間以流動(dòng)相來平衡色譜柱，您就會(huì)在處理問題方面獲得大的"補(bǔ)償"，而且您的色譜柱的壽命也會(huì)變得更長!

　　操作步驟：

　　a.平衡開始時(shí)將流速緩慢地提高，用流動(dòng)相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線(緩沖鹽或離子對試劑流速如果較低，則需要較長的時(shí)間來平衡)

　　b.如果使用的流動(dòng)相中含有緩沖鹽，應(yīng)注意用純水"過渡"即每天分析開始前必須先用純水沖洗30分鐘以上再用緩沖鹽流動(dòng)相平衡;分析結(jié)束后必須先用純水沖洗30分鐘以上除去緩沖鹽之后再用甲醇沖洗30分鐘保護(hù)柱子。

　　二、色譜柱的再生

　　長期使用的色譜柱，往往柱效會(huì)下降(柱子的理論塔板數(shù)減低)?？梢詫ιV柱進(jìn)行再生，在有條件的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)使用一個(gè)廉價(jià)的泵進(jìn)行柱子的再生。

　　建議用來沖洗柱子的溶劑體積

　　色譜柱尺寸柱體積所用溶劑的體積

　　125-4mm 1.6ml 30ml

　　250-4 mm 3.2ml 60ml

　　250-10mm 20ml 400ml

　　選擇再生方法：

　　極性固定相(如Si，NH2 ，DIOL基色譜填料)的再生：正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水

　　非極性固定相(如反相色譜填料RP-18，RP-8，CN等)的再生：水→乙腈→氯仿(或異丙醇)→乙腈→水

　　注意：

　　a. 在對NH2改性的色譜柱進(jìn)行再生時(shí)，由于NH2可能以銨根離子的形式存在，因此應(yīng)該在水洗后用0.1M的氨水沖洗，然后再用水沖洗至堿溶液*流出

　　b. 0.05M稀硫酸可以用來清洗已污染的色譜柱，如果簡單的用有機(jī)溶劑/水的處理不能夠*洗去硅膠表面吸附的雜質(zhì)，在水洗后加用0.05M稀硫酸沖洗非常有效。

　　三、色譜柱的維護(hù)

　　a.使用預(yù)柱保護(hù)分析柱(硅膠在極性流動(dòng)相/離子性流動(dòng)相中有一定的溶解度)

　　b.大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2-7.5，盡量不超過該色譜柱的pH范圍

　　c.避免流動(dòng)相組成及極性的劇烈變化

　　d.流動(dòng)相使用前必須經(jīng)脫氣和過濾處理

　　e.如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動(dòng)相，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)完畢柱子沖洗干凈，并保存于甲醇或乙腈中

　　f.色譜柱氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性，故使用時(shí)要注意，柱及連接管內(nèi)不能長時(shí)間存留此類溶劑，以避免腐蝕。

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