BGC-803-LUC人胃癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記 處理方法
細(xì)胞名稱：人胃癌細(xì)胞；MGC-803
組織來源：胃癌細(xì)胞
培養(yǎng)條件：【BGC-803細(xì)胞】人胃癌細(xì)胞RPMI1640(W/oHepes)胎牛血清，10%
形態(tài)：貼壁；上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞來源：：從一位53歲男性原發(fā)性胃低分化粘液樣腺癌患者建立。
我們有細(xì)胞庫和專業(yè)實(shí)驗(yàn)室無菌操作，同時(shí)接受客戶復(fù)蘇、委托培養(yǎng)服務(wù)，并提供的科研項(xiàng)目解決方案以及實(shí)驗(yàn)服務(wù)。購買我司細(xì)胞的客戶請先與公司細(xì)胞銷售人員核實(shí)訂購的細(xì)胞株名稱、種屬、貨號(hào)、數(shù)量、協(xié)商細(xì)胞價(jià)格并預(yù)約發(fā)貨期與提取方式。向銷售人員索取細(xì)胞株說明書并認(rèn)真閱讀以方便你的實(shí)驗(yàn)操作。
對于培養(yǎng)，只要我們細(xì)心操作，注意細(xì)節(jié)，并不是大家說的那樣困難。對于有經(jīng)驗(yàn)和有條件的客戶，我們提供專人指導(dǎo)。對于無培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)和條件的客戶，建議由公司代為培養(yǎng)細(xì)胞及進(jìn)行后續(xù)研究。我司對每一位客戶追蹤服務(wù)，因材施教，對產(chǎn)品不僅售前負(fù)責(zé)，售后更負(fù)責(zé)。
我司BGC-803(人胃癌細(xì)胞)來源于ATCC細(xì)胞庫，價(jià)格實(shí)惠，質(zhì)量有保證。嚴(yán)格質(zhì)量控制，采用干冰保存運(yùn)輸方式。所售細(xì)胞均現(xiàn)貨供應(yīng)，*提供專業(yè)的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)指導(dǎo)，也可代為培養(yǎng)。

BGC-803(人胃癌細(xì)胞)腺病毒轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞；AAV-293

SV40轉(zhuǎn)染人成骨細(xì)胞；hFOB 1.19

SV40T轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞；293T

人胚腎細(xì)胞；293 Cells, low passage

產(chǎn)品名稱：BGC-803(人胃癌細(xì)胞)

英文名稱：BGC-803 (human gastric carcinoma cell)

規(guī)格：5×105cells/瓶

產(chǎn)品貨號(hào)：EY-X0820

作用：科研使用不可應(yīng)用于治療等其他方面

品    質(zhì)：高活性，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)效果好

使用范圍：僅供科研使用

細(xì)胞特性：經(jīng)測試，本產(chǎn)品具有良好的增殖和分化潛能，可分化為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞等。流式檢測結(jié)果顯示，CD29、CD44、CD105陽性，CD34、CD45陰性。

運(yùn)輸保存：采用干冰保存運(yùn)輸。收到細(xì)胞時(shí)，若干冰已經(jīng)*融化，請立即將細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)；若尚留有干冰，請立即將細(xì)胞放入液氮中保存待用，請按條件貯存細(xì)胞，切不可將細(xì)胞置于高溫環(huán)境。

BGC-803-LUC人胃癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記 復(fù)蘇操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

1. 慢病毒包裝部分

1. 質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一天，293T在10cm培養(yǎng)盤中的細(xì)胞達(dá)到90％，胰酶消化后，1：3傳入新10cm培養(yǎng)盤中。轉(zhuǎn)染時(shí)，細(xì)胞在培養(yǎng)盤中密度達(dá)到80％。采用脂質(zhì)體PEI轉(zhuǎn)染法使編碼慢病毒包膜蛋白的質(zhì)粒VSV G, Packaging Mix以及構(gòu)建的Gluc或Mluc質(zhì)粒15µg共轉(zhuǎn)染。6h后換新鮮DMEM培養(yǎng)基。

2．提取病毒上清：轉(zhuǎn)染48-72hours后，將含有病毒液的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到15ml離心管中,在低溫4攝氏度條件下，3000rpm，離心10min去除片狀沉淀的細(xì)胞碎片。

3．濃縮病毒：將病毒上清用0.45um濾器過濾至濃縮離心管中，2000rpm，4℃，15min離心。濃縮液收集于500µl離心管中，-80℃保存。