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BxPC-3-LUC人原位胰腺腺癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記 處理方法

來源:上海琛藝實(shí)業(yè)有限公司   2020年01月14日 08:58  

BXPC-3(BXPC3)人胰腺腺癌細(xì)胞【已通過STR鑒定】

細(xì)胞英文(簡(jiǎn)稱):BXPC-3(BXPC3)

細(xì)胞名稱:BxPC-3-LUC人原位胰腺腺癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記 處理方法

背景資料

該細(xì)胞株不表達(dá)囊腫性纖維化跨膜電導(dǎo)調(diào)節(jié)子(CFTR)。 

細(xì)胞來源:ATCC CRL-1687

代次:P3

規(guī)格:T25

細(xì)胞數(shù):1x10^6 cells

組織來源:胰腺;腺癌

BXPC-3(BXPC3)人胰腺腺癌細(xì)胞【已通過STR鑒定】 形態(tài):貼壁;上皮細(xì)胞樣

細(xì)胞活力:95%(Viability by Trypan Blue Exclusion)

細(xì)胞檢測(cè):細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌

培養(yǎng)條件:DMEM(高糖) +10% FBS;37℃,5% CO2

傳代方法:*建議1:2-1:3 兩天換液一次

凍存條件:90%FBS+10%DMSO

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng),大致的步驟是這樣:

1.從動(dòng)物胚胎或者一些剛出生的動(dòng)物的器官或者組織上取得細(xì)胞,配制成細(xì)胞懸浮液.把細(xì)胞液放到培養(yǎng)瓶中,在培養(yǎng)箱里培養(yǎng)--------原代培養(yǎng).

但是,不要以為這樣就能一直無限培養(yǎng)下去.

因?yàn)锽XPC-3(BXPC3)人胰腺腺癌細(xì)胞【已通過STR鑒定】 在那個(gè)瓶壁上生長(zhǎng)的時(shí)候,如果大量增殖,細(xì)胞之間會(huì)彼此相碰,細(xì)胞細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖,出現(xiàn)一種接觸抑制.

2.我們?yōu)榱怂鼈兡芾^續(xù)增殖,就用胰蛋白酶再把它們分開,然后再配制成細(xì)胞懸浮液,分開裝到好幾個(gè)瓶子里繼續(xù)培養(yǎng)--------傳代培養(yǎng).

1. BxPC-3-LUC人原位胰腺腺癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記 處理方法慢病毒感染&篩選

1.感染前一天(Day1),消化4T1細(xì)胞并計(jì)數(shù),將細(xì)胞鋪于24孔板中(以便在感染前細(xì)胞達(dá)到30%-50%的匯合度,37°C過夜孵化細(xì)胞。

2.(Day2) 解凍低溫保存的慢病毒液,并且制備1:2病毒稀釋液200µl加入細(xì)胞中。

3.向每孔加入Polybrene達(dá)到終濃度6ug/ml,晃勻孔板,37度孵化過夜。

4.(Day3)移去含有慢病毒的培養(yǎng)基,加入500µl*培養(yǎng)基。

5.(Day4)換液,加入300µg/ml  Hygromycin(Sigma)來選擇穩(wěn)定感染的細(xì)胞克隆。

6.(Day4-7),每24h換液,300µg/ml Hygromycin(Sigma)來選擇穩(wěn)定感染的細(xì)胞克隆。

維持培養(yǎng)。

7.(Day8-12)細(xì)胞逐漸由24孔板傳入6孔板、6cm盤和10cm盤中100µg/ml Hygromycin維持培養(yǎng)。

8. 4T1-Gluc/Mluc細(xì)胞系鑒定: 取5×104細(xì)胞,用Passive Lysis裂解液裂解,加入熒光素酶作用底物,將轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的細(xì)胞與陰性,陽性對(duì)照共同進(jìn)行單報(bào)告基因檢測(cè)。GFP和mCherry表達(dá)通過熒光顯微鏡觀察。

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