BxPC-3-LUC人原位胰腺腺癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記 處理方法
BXPC-3(BXPC3)人胰腺腺癌細(xì)胞【已通過STR鑒定】
細(xì)胞英文(簡(jiǎn)稱):BXPC-3(BXPC3)
細(xì)胞名稱:BxPC-3-LUC人原位胰腺腺癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記 處理方法
背景資料
該細(xì)胞株不表達(dá)囊腫性纖維化跨膜電導(dǎo)調(diào)節(jié)子(CFTR)。
細(xì)胞來源:ATCC CRL-1687
代次:P3
規(guī)格:T25
細(xì)胞數(shù):1x10^6 cells
組織來源:胰腺;腺癌
BXPC-3(BXPC3)人胰腺腺癌細(xì)胞【已通過STR鑒定】 形態(tài):貼壁;上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞活力:95%(Viability by Trypan Blue Exclusion)
細(xì)胞檢測(cè):細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌
培養(yǎng)條件:DMEM(高糖) +10% FBS;37℃,5% CO2
傳代方法:*建議1:2-1:3 兩天換液一次
凍存條件:90%FBS+10%DMSO
動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng),大致的步驟是這樣:
1.從動(dòng)物胚胎或者一些剛出生的動(dòng)物的器官或者組織上取得細(xì)胞,配制成細(xì)胞懸浮液.把細(xì)胞液放到培養(yǎng)瓶中,在培養(yǎng)箱里培養(yǎng)--------原代培養(yǎng).
但是,不要以為這樣就能一直無限培養(yǎng)下去.
因?yàn)锽XPC-3(BXPC3)人胰腺腺癌細(xì)胞【已通過STR鑒定】 在那個(gè)瓶壁上生長(zhǎng)的時(shí)候,如果大量增殖,細(xì)胞之間會(huì)彼此相碰,細(xì)胞細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖,出現(xiàn)一種接觸抑制.
2.我們?yōu)榱怂鼈兡芾^續(xù)增殖,就用胰蛋白酶再把它們分開,然后再配制成細(xì)胞懸浮液,分開裝到好幾個(gè)瓶子里繼續(xù)培養(yǎng)--------傳代培養(yǎng).
1. BxPC-3-LUC人原位胰腺腺癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記 處理方法慢病毒感染&篩選
1.感染前一天(Day1),消化4T1細(xì)胞并計(jì)數(shù),將細(xì)胞鋪于24孔板中(以便在感染前細(xì)胞達(dá)到30%-50%的匯合度,37°C過夜孵化細(xì)胞。
2.(Day2) 解凍低溫保存的慢病毒液,并且制備1:2病毒稀釋液200µl加入細(xì)胞中。
3.向每孔加入Polybrene達(dá)到終濃度6ug/ml,晃勻孔板,37度孵化過夜。
4.(Day3)移去含有慢病毒的培養(yǎng)基,加入500µl*培養(yǎng)基。
5.(Day4)換液,加入300µg/ml Hygromycin(Sigma)來選擇穩(wěn)定感染的細(xì)胞克隆。
6.(Day4-7),每24h換液,300µg/ml Hygromycin(Sigma)來選擇穩(wěn)定感染的細(xì)胞克隆。
維持培養(yǎng)。
7.(Day8-12)細(xì)胞逐漸由24孔板傳入6孔板、6cm盤和10cm盤中100µg/ml Hygromycin維持培養(yǎng)。
8. 4T1-Gluc/Mluc細(xì)胞系鑒定: 取5×104細(xì)胞,用Passive Lysis裂解液裂解,加入熒光素酶作用底物,將轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的細(xì)胞與陰性,陽性對(duì)照共同進(jìn)行單報(bào)告基因檢測(cè)。GFP和mCherry表達(dá)通過熒光顯微鏡觀察。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。