上海琛藝實業(yè)有限公司新增細胞庫，具有自己的研發(fā)細胞培養(yǎng)庫，上千株細胞具有STR鑒定，開學大放送，*，同時還有好禮相送，具體歡迎咨詢我們銷售人員。。。。

產品名稱：NCI-H1299-GFP人肺腺癌細胞-綠色標記細胞 培養(yǎng)方法

?細胞數量： 1*10^6

?細胞種屬： 人源

?生長特性： 貼壁

?培養(yǎng)基： DMEM-H

?形態(tài)特征： 成纖維細胞樣

?傳代方法： 1:3傳代,2-3天傳一代

?培養(yǎng)條件： 胎牛血清至終濃度為10％。環(huán)境：空氣，95％;二氧化碳（CO2），5％；溫度，37℃

?細胞描述： 親本L的亞克隆，是早建立的連續(xù)傳代細胞之一，L細胞源自100天的雄性C3H/An小鼠的皮下網眼狀空隙和脂肪組織。APRT+，HPRT+。

?細胞凍存： 液氮凍存（凍存液基礎培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO）

?細胞運輸： 干冰運輸（2ml凍存管）或活細胞運輸（T25瓶）

NCI-H1299-GFP人肺腺癌細胞-綠色標記細胞 培養(yǎng)方法

形態(tài)特性 上皮細胞樣　 

生長特性 貼壁生長 

凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS　 

細胞周期分為細胞間期和細胞分裂期，細胞間期較長，而細胞分裂期較短。

細胞間期是為細胞分裂的準備時期，表現為細胞增大，營養(yǎng)物質增多。細胞分裂期則是一個細胞由兩個細胞分解為一個細胞的過程。

細胞是生命的基本單位，細胞的特殊性決定了個體的特殊性，因此，對細胞的深入研究是揭開生命奧秘、改造生命和征服疾病的關鍵。細胞生物學已經成為當代生物科學中發(fā)展zui快的一門學科，是生物、農學、醫(yī)學、畜牧、水產和許多生物相關專業(yè)的一門必修課程。

依據細胞種類和濃度，于無菌操作臺內取 10 ml培養(yǎng)基加至 T25或 T75 flask中。取出已解凍之細胞懸浮液，緩緩加入T25 或T75 flask 內之培養(yǎng)基， 混 合均勻，放入37 °C，5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

培養(yǎng)步驟：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL*培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

1、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的*培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細胞，*脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右*培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。

2、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，進行離心收集，1000RPM條件下離心8-10分鐘，去除上清，按凍存數量加入血清及DMSO，凍存比例為90%FBS+10%DMSO。

PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右*培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。

上海琛藝是一家專業(yè)從事細胞培養(yǎng)相關產品的公司，擁有獨立細胞房（可隨時約定參觀），供應胎牛血清，STR鑒定細胞，感受態(tài)細胞等，專業(yè)，專注，性價比高，是您Shou選之家。

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