羥自由基清除能力測(cè)定試劑盒說(shuō)明書

可見分光光度法

注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義

羥自由基作用于體內(nèi)蛋白質(zhì)、核酸、脂類等生物分子，造成細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能受損，進(jìn)而導(dǎo)致體內(nèi)代謝紊亂引起疾病。羥自由基清除能力是樣品抗氧化能力的重要指標(biāo)之一，在抗氧化類

保健品和藥品研究中得到廣泛應(yīng)用。

測(cè)定原理

H₂O₂/ Fe²⁺通過Fenton 反應(yīng)產(chǎn)生羥自由基，將鄰二氮菲- Fe²⁺水溶液中 Fe²⁺氧化為Fe³⁺，導(dǎo)致 536nm吸光度下降，樣品對(duì)536nm吸光度下降速率的抑制程度，反映了樣品清除羥自由基的能力。

自備實(shí)驗(yàn)用品

可見分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配制

提取液：液體 50 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 8 mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑二：液體 20 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 5 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體 5 mL×1 瓶，4℃保存。

樣品的制備

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，

加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2. 血清、果汁等液體樣品可直接測(cè)定。

3. 提取物（或者藥物）可配制成一定濃度，如 5 mg/mL。

操作步驟

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。

計(jì)算公式

羥自由基清除率 D% =（OD測(cè)定管- OD對(duì)照管）÷（OD空白管-OD對(duì)照管）×100%

注意事項(xiàng)

為了比較不同樣品羥自由基清除能力，對(duì)于同一批樣品必須加入等量的樣品，血清、組織勻漿、果汁等液體樣品加入同樣體積，提取物（或者藥物）配制成同樣濃度。

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