HepG2-GFP人肝癌綠色標(biāo)記細(xì)胞 培養(yǎng)步驟
上海琛藝實(shí)業(yè)有限公司是一家專注于進(jìn)口試劑與細(xì)胞銷售，實(shí)驗(yàn)室P3級(jí)凈化設(shè)計(jì)與安裝，生物醫(yī)藥技術(shù)研發(fā)與應(yīng)用為一體的生物高科技公司。公司擁有一支高效率，高技術(shù)，高素質(zhì)的專業(yè)團(tuán)隊(duì)，在科研領(lǐng)域與上海中科院生物醫(yī)藥與健康研究院、上海交通大學(xué)等院校和科研機(jī)構(gòu)建立有穩(wěn)固的協(xié)作伙伴關(guān)系，在科學(xué)城孵化器設(shè)立有P3級(jí)實(shí)驗(yàn)室。

原代細(xì)胞系構(gòu)建，耐藥株篩選，Cas9基因敲除株，STR檢測及動(dòng)物模型構(gòu)建，課題設(shè)計(jì)整體服務(wù)！細(xì)胞-動(dòng)物產(chǎn)品研發(fā)與服務(wù)平臺(tái),PDX新一代藥篩平臺(tái).

技術(shù)：凡是從我司購進(jìn)的細(xì)胞可聯(lián)系工作人員索要相關(guān)細(xì)胞說明書資料。且提供技術(shù)支持服務(wù)。

規(guī)格：70%密度的T25培養(yǎng)瓶的細(xì)胞一瓶/1ml凍存細(xì)胞2管，干冰運(yùn)輸
包裝：細(xì)胞代數(shù)為4代以內(nèi)包裝：內(nèi)層無菌自封袋；防壓泡沫盒；外層防壓保溫氣泡袋；或干冰運(yùn)輸

貨期：4代復(fù)蘇細(xì)胞，1-2周（不含節(jié)假日）/1代凍存細(xì)胞，1-2個(gè)工作日

售后：收到細(xì)胞后7天內(nèi)，如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有質(zhì)量問題（如污染，死亡，快遞運(yùn)輸?shù)仍颍r(shí)，應(yīng)及時(shí)拍照反饋給銷售人員，我們將盡快為您解決！

我們的細(xì)胞在發(fā)貨之前會(huì)進(jìn)行質(zhì)檢，并在發(fā)貨時(shí)附帶質(zhì)檢報(bào)告。
質(zhì)檢內(nèi)容:
1、細(xì)胞存種的活性和增殖檢測
2、發(fā)貨前的細(xì)菌/真菌/霉菌污染物鏡檢
3、發(fā)貨前的支原體/衣原體 PCR檢測
產(chǎn)品名：HepG2-GFP-Puro

物種：人肝癌細(xì)胞

保存體系：-80°C短期保存，液氮長期保存

培養(yǎng)條件：DMEM+10%FBS

生長類型：貼壁生長

運(yùn)輸方式：新鮮細(xì)胞常溫運(yùn)輸，凍存細(xì)胞干冰運(yùn)輸

復(fù)蘇流程：細(xì)胞復(fù)蘇：

1.帶上防護(hù)面罩及防凍手套，從液氮罐中取出細(xì)胞，并迅速放入37°C水浴鍋中解凍。

2.細(xì)胞解凍后，通過傳遞倉將細(xì)胞傳遞至細(xì)胞房內(nèi)。

3.在生物安全柜內(nèi)，取出一只15mL無菌離心管，使用1mL移液器向15mL離心管內(nèi)加入4mL 培養(yǎng)基。

4.使用75%的醫(yī)用消毒酒精棉球仔細(xì)擦拭上述在37°C水浴鍋中解凍的細(xì)胞凍存管外表面，進(jìn)行表面消毒。在生物安全柜內(nèi)，擰開細(xì)胞凍存管，然后用1mL移液器將管內(nèi)的細(xì)胞懸液吸出，逐滴加入至上述準(zhǔn)備的含有4mL培養(yǎng)基的15mL離心管中，將15mL離心管蓋子旋緊，緩慢上下顛倒4次，使細(xì)胞懸液混勻。

5.將含有細(xì)胞懸液的離心管置于離心機(jī)中，設(shè)置離心參數(shù)如下：200xg、室溫（~25°C）離心5分鐘。

6.離心結(jié)束后，將離心管輕輕轉(zhuǎn)移至生物安全柜中，此時(shí)細(xì)胞離心管底部可見白色細(xì)胞團(tuán)。使用電動(dòng)吸引器將培養(yǎng)基上清吸掉（細(xì)胞團(tuán)比較松散，注意不要觸及底部的細(xì)胞團(tuán)）。

7.使用1mL移液器加入2mL*培養(yǎng)基，輕輕吹打5次重懸細(xì)胞團(tuán)，計(jì)數(shù)，接種。

8.將細(xì)胞放置培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)。
培養(yǎng)步驟：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL*培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

HepG2-GFP人肝癌綠色標(biāo)記細(xì)胞 培養(yǎng)步驟
 
1、對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的*培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞，*脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后，用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺(tái)或安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右*培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。