人多巴色素異構(gòu)酶(DT)ELISA試劑盒*用于測定血清、血漿及相關(guān)液體樣本中的含量。試劑盒嚴格按照說明書的操作進行，試劑不同批號組分不得混用。

  ELISA法測定試劑盒規(guī)格參數(shù)：

  中文名稱：人多巴色素異構(gòu)酶(DT)ELISA試劑盒

  規(guī)格：96T/48T

  性狀：液體

  存儲：4℃保存6個月

  運輸方式：快遞發(fā)貨

  檢測標本：血清，血漿，尿液，胸腹水，腦脊液，細胞培養(yǎng)上清，組織勻漿等

檢測方法：雙抗夾心法

人多巴色素異構(gòu)酶(DT)ELISA試劑盒*相關(guān)實驗研究：

多巴色素異構(gòu)酶調(diào)節(jié)DHICA介導的抗氧化作用機制研究
摘要：人類表皮黑素細胞通過產(chǎn)生黑素,從而對紫外線輻射和氧化應急具有關(guān)鍵的防護作用。黑素在黑素小體(melanosome)中合成。酪氨酸酶(Tyr)、酪氨酸酶相關(guān)蛋白1(Tyrp1)和多巴色素異構(gòu)酶(Dct)以多酶復合體的形式存在于黑素小體膜,共同參與對黑素細胞黑素生成的調(diào)節(jié)。酪氨酸酶家族包括三種成員：酪氨酸酶、酪氨酸酶相關(guān)蛋白1、多巴色素異構(gòu)酶,它們在黑素合成過程中具有不同的作用。Tyr基因與Tyrp1基因發(fā)生突變可引起1型或3型眼皮膚型白化病,但很少有關(guān)于Dct基因突變直接導致人類色素性疾病的報道。位于小鼠14號染色體上的Dct基因編碼區(qū)第194位精氨酸被谷氨酰胺置換(R194Q)發(fā)生slaty突變,使Dct酶活性降為野生型的36%。但salty突變黑素細胞中黑素小體的成熟發(fā)育過程是否受到影響尚不清楚。本研究通過比較salty突變黑素細胞與野生型melan-a黑素細胞中黑素生成蛋白表達與黑素小體的發(fā)育形態(tài),闡述Dct基因突變對黑素細胞結(jié)構(gòu)及發(fā)育的影響。盡管人們早就認識到一些黑素生成中間產(chǎn)物,如L-3,4-左旋多巴和DHI,氧化時能產(chǎn)生大量活性氧基使細胞造成損傷。
試劑盒的組成： 
（1）結(jié)合物及標本的稀釋液；
（2）洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水；
（3）酶標記的抗原或抗體（結(jié)合物）；
（4）酶的底物；
（5）陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），elisa試劑盒參考標準品和控制血清（定量測定中）；
（6）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）
用途：科研與實驗試劑，不得用于臨床診斷。
檢測種屬：人、大小鼠、兔、羊、猴、豬、豚鼠ELISA檢測試劑盒等種屬。
標本：血清、血漿、細胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。 
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人多巴色素異構(gòu)酶(DT)ELISA試劑盒*雙抗體夾心ELISA法定量測定人血清、血漿、組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養(yǎng)上清液和其他生物液體含量。

液體類標本：
包括血清，血漿，尿液，胸腹水，腦脊液，細胞培養(yǎng)上清液等。
血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細收集上清，如保存過程中如有沉淀，請再次離心。
血漿：
應根據(jù)標本的要求選擇EDTA，檸檬酸鈉或者肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，在離心20分鐘（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細收集上清，如保存過程中有沉淀，請再次離心。
尿液：
用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細收集上清，如保存過程中有沉淀，請再次離心。
細胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，當細胞濃度達到100萬/ml左右，通過反復凍融，使細胞破壞并釋放細胞內(nèi)的成份，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細收集上清，如保存過程中有沉淀，請再次離心。
組織標本：
切割標本后，稱取重量，加入一定量的PBS（PH7.4），用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?，標本融化后仍保?-8℃的溫度，加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細收集上清，分裝后留一份待檢測，其余冷凍備用。
  酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒原理：

  1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標抗體技術(shù)發(fā)展成液體標本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基本原理是：①使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時，把受檢標本（測定其中的抗體或抗原）和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其他物質(zhì)分開，zui后結(jié)合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應的深淺刊物定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可極大地放大反應效果，從而使測定方法達到很高的敏感度。

  酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒檢測方法:

  夾心法

  夾心法常用于檢測大分子抗原，一般之操作步驟為：

  1、將具有專一性之抗體固著（coating）于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體；

  2、加入待測檢體，檢體中若含有待測之抗原，則其會與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結(jié)；

  3、洗去多余待測檢體，加入另一種對抗原專一之一次抗體，與待測抗原進行鍵結(jié)；

  4、洗去多余未鍵結(jié)一次抗體，加入帶有酵素之二次抗體，與一次抗體鍵結(jié)；

  5、洗去多余未鍵結(jié)二次抗體，加入酵素受質(zhì)使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果。

  間接法

  間接法常用于檢測抗體，一般之操作步驟為：

  1、將已知之抗原固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余之抗原；

  2、加入待測檢體，檢體中若含有待測之一次抗體，則其會與塑膠孔盤上的抗原進行專一性鍵結(jié)；

  3、洗去多余待測檢體，加入帶有酵素之二次抗體，與待測之一次抗體鍵結(jié)；

  4、洗去多余未鍵結(jié)二次抗體，加入酵素受質(zhì)使酵素呈色，藉儀器（ELISA reader）測定塑膠盤中的吸光值（OD值），以評估有色終產(chǎn)物的含量即可測量待測抗體的含量。

  競爭法

  競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制，一般用于檢測小分子抗原，其操作步驟為：

  1、將具有專一性之抗體固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體；

  2、加入待測檢體，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結(jié)；

  3、加入帶有酵素之抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結(jié)，由于塑膠孔盤上固著的抗體數(shù)量有限，因此當檢體中抗原的量越多，則帶有酵素之抗原可鍵結(jié)的固著抗體就越少，亦即，兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結(jié)，即所謂競爭法之由來；

  4、洗去檢體與帶有酵素之抗原，加入酵素受質(zhì)使酵素呈色，當檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤內(nèi)留下之帶有酵素的抗原越少，顯色也就越淺。

  當需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原，或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤上時，一般會考慮使用競爭法ELISA。

  酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒結(jié)果判斷：

  定性測定

  定性測定的結(jié)果判斷是對受檢標本中是否含有待測抗原或抗體作出"有"或"無"的簡單回答，分別用"陽性"、"陰性"表示。"陽性"表示該標本在該測定系統(tǒng)中有反應。"陰性"則為無反應。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果，即用滴度來表示反應的強度，其實質(zhì)仍是一個定性試驗。在這種半定量測定中，將標本作一系列稀釋后進行試驗，呈陽性反應的zui高稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低，可以判斷標本反應性的強弱，這比觀察不稀釋標本呈色的深淺判斷為強陽性、弱陽性更具定量意義。

  在間接法和夾心法ELISA中，陽性孔呈色深于陰性孔。在競爭法ELISA中則相反，陰性孔呈色深于陽性孔。

  定量測定

  ELISA操作步驟復雜，影響反應因素較多，特別是固相載體的包被難達到各個體之間的*，因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標準品在相同的條件下制作標準曲線。測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA，標準曲線的范圍一般較寬，曲線zui高點的吸光度可接近2.0，繪制時常用半對數(shù)紙，以檢測物的濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標，將各濃度的值逐點連接，所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，中央較呈直線的部分是的檢測區(qū)域。

  測定小分子量物質(zhì)常用競爭法，其標準曲線中吸光度與受檢物質(zhì)的濃度呈負相關(guān)。標準曲線的形狀因試劑盒所用模式的差別而略有不同。ELISA測定的標準曲線注意圖中橫坐標為對數(shù)關(guān)系，這更有利于測定系統(tǒng)的表達。

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