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IEC-6-GFP大鼠小腸引窩上皮綠色標(biāo)記細(xì)胞 培養(yǎng)步驟

來源:上海琛藝實(shí)業(yè)有限公司   2020年03月16日 11:52  

IEC-6細(xì)胞傳代細(xì)胞,活性好、存活率高、質(zhì)量保證,生長狀態(tài)良好,沒有細(xì)菌 真菌 支原體等微生物污染。IEC-6細(xì)胞一般以T25培養(yǎng)瓶包裝,容積75ml細(xì)胞數(shù)量可達(dá)10的6次方左右。

細(xì)胞名稱:IEC-6-GFP大鼠小腸引窩上皮綠色標(biāo)記細(xì)胞 培養(yǎng)步驟

物種:大鼠

規(guī)格:T25培養(yǎng)瓶,1×106cells

形態(tài)特征:上皮細(xì)胞樣

生長特性:貼壁

產(chǎn)品描述
皮質(zhì)醇可抑制該細(xì)胞的生長。該細(xì)胞表達(dá)腸上皮*抗原,在20代以前保持恒定的生長速度和細(xì)胞形態(tài),此后生長速度迅速下降,細(xì)胞形態(tài)也發(fā)生改變。

培養(yǎng)條件:DMEM-H 5%FBS 0.01mg/ml Insulin

傳代方法:1:3-1:6傳代,每周換液2次。

IEC-6細(xì)胞復(fù)蘇時如何換液呢?

1凍存細(xì)胞取出后37℃速溶,取15ml離心管,加入10ml含血清培養(yǎng)基,將凍存管中液體(通常1.5ml)也加入離心管中,習(xí)慣輕吹幾下混勻,1200轉(zhuǎn)常溫離心5min,去掉上清,加入5ml含血清培養(yǎng)基,輕吹制成細(xì)胞懸液,加入到培養(yǎng)瓶中,即可。

注意,新復(fù)蘇的IEC-6細(xì)胞不要經(jīng)常去看去動。

換液的話,只要把培養(yǎng)基吸出,再加入新的培養(yǎng)基就可以了

如果你復(fù)蘇的細(xì)胞長得很不均勻,可以胰酶消化下來再混勻后在重新加進(jìn)去(像正常細(xì)胞一樣做)。

兩種方案可供選擇:

一、復(fù)蘇時,行離心,棄上清后,種入瓶中。主要目的是防止DMSO對細(xì)胞造成損害,但剛復(fù)蘇的細(xì)胞教脆弱,離心易導(dǎo)致細(xì)胞破碎。

二、IEC-6細(xì)胞復(fù)蘇時,直接將凍存管里的液體倒入培養(yǎng)瓶中,另外添加適量的培養(yǎng)基,孵箱24h,待貼壁后行常規(guī)換液。省去了離心一步,避免離心時細(xì)胞破裂。但DMSO未能去除,長時間培養(yǎng)可能會對細(xì)胞有損害。個人覺得第二種方案較方便。
 
IEC-6-GFP大鼠小腸引窩上皮綠色標(biāo)記細(xì)胞 培養(yǎng)步驟
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加4-6mL*培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中),培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
 
1、對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的*培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞,*脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
PS:若客戶收到2ml小管細(xì)胞,收到細(xì)胞后,用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi),嚴(yán)格無菌操作;將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿,加入5ml左右*培養(yǎng)基混勻,放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度:若密度未超過80%,換液繼續(xù)培養(yǎng),視情況傳代或者凍存。若密度超過80%,可直接進(jìn)行傳代(方法同上)。
2、對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
 
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,進(jìn)行離心收集,1000RPM條件下離心8-10分鐘,去除上清,按凍存數(shù)量加入血清及DMSO,凍存比例為90%FBS+10%DMSO。
 
PS:若客戶收到2ml小管細(xì)胞,收到細(xì)胞后,用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi),嚴(yán)格無菌操作;將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿,加入5ml左右*培養(yǎng)基混勻,放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度:若密度未超過80%,換液繼續(xù)培養(yǎng),視情況傳代或者凍存。若密度超過80%,可直接進(jìn)行傳代(方法同上)。
 
上海琛藝是一家專業(yè)從事細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)產(chǎn)品的公司,擁有獨(dú)立細(xì)胞房(可隨時約定參觀),供應(yīng)胎牛血清,STR鑒定細(xì)胞,感受態(tài)細(xì)胞等,專業(yè),專注,性價比高,是您Shou選之家。

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