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一文看懂細(xì)胞株構(gòu)建的原理
動物細(xì)胞是生產(chǎn)治療性重組蛋白的強(qiáng)有力工具。為與小分子藥物區(qū)別開來，治療性蛋白、疫苗以及細(xì)胞治療產(chǎn)品統(tǒng)稱為生物制品。宿主細(xì)胞的選擇和改造對于提高產(chǎn)品的產(chǎn)量和質(zhì)量來說至關(guān)重要。因此必須對細(xì)胞進(jìn)行篩選，選出具有高表達(dá)量和良好生長特性的細(xì)胞。在此我們主要討論適用于大規(guī)模生產(chǎn)重組蛋白的細(xì)胞株的篩選。
工業(yè)上重組蛋白的制備主要有兩種方式：瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。瞬時轉(zhuǎn)染經(jīng)常用于制備少量蛋白（多達(dá)克級）用于藥物開發(fā)早期的蛋白活性或動物實驗。瞬時轉(zhuǎn)染并不產(chǎn)生克隆細(xì)胞株，它只是暫時將編碼外源蛋白的質(zhì)粒轉(zhuǎn)導(dǎo)入已有的細(xì)胞株里面（比如HEK293或COS細(xì)胞）。隨著細(xì)胞的分裂外源基因不斷丟失，蛋白產(chǎn)量較低，一般在1-100mg/L。近年來有報道稱HEK293細(xì)胞中瞬時表達(dá)產(chǎn)量可達(dá)1g/L。
與瞬時轉(zhuǎn)染不同，穩(wěn)定細(xì)胞株是為工業(yè)化生產(chǎn)治療性蛋白而構(gòu)建的。穩(wěn)定細(xì)胞株需要具備在不同的時間，不同的場地以及不同的批次間生產(chǎn)相同質(zhì)量產(chǎn)品的能力。在選定生產(chǎn)用細(xì)胞株之后，需要建立主細(xì)胞庫（mater cell bank）。從主細(xì)胞庫復(fù)蘇后，擴(kuò)增建立工作細(xì)胞庫（working cell bank），工作細(xì)胞庫用于生產(chǎn)。細(xì)胞庫通常保存在液氮中，需要維持整個產(chǎn)品的生命周期。在構(gòu)建生產(chǎn)用細(xì)胞株的過程中，宿主細(xì)胞和表達(dá)載體至關(guān)重要。
穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建---高產(chǎn)細(xì)胞株的秘密
CHO和骨髓瘤細(xì)胞是構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株常用的兩種宿主細(xì)胞?；旧嫌眠@兩類細(xì)胞生產(chǎn)的治療性蛋白都能分泌到細(xì)胞外，從而可以從細(xì)胞培養(yǎng)液中收獲產(chǎn)物。CHO細(xì)胞屬于成纖維細(xì)胞，是一種非分泌型細(xì)胞，它本身很少分泌內(nèi)源蛋白。
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