細胞免疫熒光實驗步驟

來源：上海嶸崴達實業(yè)有限公司 2011年07月19日 14:27

細胞免疫熒光實驗步驟

1. 細胞一定要貼在玻片上（可以放入24孔板），為后面照像打基礎(chǔ)。細胞密度適中，大約60-75%滿片即可，否則容易脫片。

2. 取出細胞后用4%多聚甲醛固定15分鐘，現(xiàn)用現(xiàn)配。（以下各步驟切毋使玻片干燥）

3. PBS沖洗

4. 0.1%Triton作用20分鐘

5. PBS沖洗

6. 10%正常血清封閉10分鐘

7. 加入一抗，4度孵育過夜（找個小瓶蓋將小玻片支起來，抗體就不容易溢出），還要記住“砸片”，就是抗體從較高處落到片子上，以分布均勻?？贵w稀釋度1：60，較常用！

8. PBS沖洗4次，各5分鐘

9加入熒光二抗，室溫30分鐘?？贵w稀釋度1：400，較常用！

10. 同8。

11. 90%甘油封片。也很關(guān)鍵阿，多封幾次才有體會。

12. 避光保存，或到顯微鏡下觀察。

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