上海琛藝實(shí)業(yè)有限公司經(jīng)過數(shù)年的努力發(fā)展已迅速成為集產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn)、經(jīng)營為一體的專業(yè)化生物工程公司。公司新引進(jìn)細(xì)胞上千株，其中人的已通過STR鑒定的有幾百株，歡迎各位選購。。。。。。

產(chǎn)品名稱：MKN-28-GFP人胃癌高轉(zhuǎn)移綠色標(biāo)記細(xì)胞 處理方法 含STR鑒定

包裝：內(nèi)層無菌自封袋；防壓泡沫盒；外層防壓保溫氣泡袋；說明書

細(xì)胞來源：ATCC、sciencell、ICLC

貨期：1-2周

運(yùn)輸方式：快遞運(yùn)輸

售后：收到細(xì)胞后12天，如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有質(zhì)量問題（如污染，死亡，快遞運(yùn)輸?shù)仍颍r(shí)，應(yīng)出具書面質(zhì)量問題報(bào)告并及時(shí)通知銷售人員，我們將盡快為您解決！

注：耐藥細(xì)胞培養(yǎng)操作流程和普通細(xì)胞培養(yǎng)方法基本一致，只是在培養(yǎng)中會(huì)加藥維持篩選壓力

MKN-28-GFP人胃癌高轉(zhuǎn)移綠色標(biāo)記細(xì)胞 處理方法

?三、細(xì)胞生長條件：

細(xì)胞系特征

細(xì)胞株名稱：MKN-28-GFP人胃癌高轉(zhuǎn)移綠色標(biāo)記細(xì)胞 處理方法

組織來源：人胃癌

生長特性：懸浮生長

微生物及支原體檢測：陰性

安全性：所有腫瘤和病毒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。

培養(yǎng)條件：

*培養(yǎng)基：90%RPMI-1640+10%胎牛血清+0.1ug/ml FU

GIBCOFBS-10099-141或HYCLONEFBS-SH30084.03。

培養(yǎng)條件：37.0C  carbon dioxide(CO2),5%

傳代方法：

收到細(xì)胞后，在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個(gè)細(xì)胞生長情況。

（一）如果細(xì)胞未長滿，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，低速離心，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液（注意不要吸出細(xì)胞），換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。

(二)如果細(xì)胞已長滿，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 低速離心，棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。

2. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加*培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中（補(bǔ)加*培養(yǎng)基至8到10ml）。如果沒有特別說明，收到細(xì)胞后的di一次傳代一般是一傳二。

注：1、觀察細(xì)胞在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，否則不能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請?jiān)?0X或20X物鏡下。

2、瓶中運(yùn)輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請換用加雙抗的新培養(yǎng)基，細(xì)胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。

3、有些細(xì)胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶內(nèi)。

4、收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請及時(shí)與我們聯(lián)系。

凍存方法：   凍存液：90%胎牛血清，10%DMSO

  儲(chǔ)存：液氮儲(chǔ)存

收到細(xì)胞后應(yīng)如何去正確的處理：

   您需要準(zhǔn)備好細(xì)胞所要用到的培養(yǎng)基和相關(guān)試劑，雖然所有的貼壁，半貼壁或者懸浮細(xì)胞處理方式差不多，但是不同的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)條件和處理力度還有試劑的批間差這些問題存在，也會(huì)導(dǎo)致對細(xì)胞處理不當(dāng)，或者環(huán)境的不適應(yīng)而造成細(xì)胞的死亡。

       1.收到細(xì)胞，di一時(shí)間要鏡檢：觀察細(xì)胞形態(tài)是否正常，對于貼壁細(xì)胞則要注意看貼壁情況是否很好，觀察細(xì)胞密度，有疑議及時(shí)咨提供細(xì)胞的技術(shù)人員。由于運(yùn)輸?shù)臅r(shí)間或者溫度的變化，很多貼壁細(xì)胞在盛滿培養(yǎng)基的瓶子里生長的狀態(tài)和平時(shí)會(huì)有點(diǎn)不一樣，主要是貼壁牢固問題。比如293T，平時(shí)貼壁就不是很牢，在裝滿的培養(yǎng)基瓶子里面，會(huì)發(fā)生大片的脫落，細(xì)胞聚集在一起，但是細(xì)胞生長還是正常的，通過離心收集，加以胰酶的消化，重新打散，又可以正常的貼壁生長。

       2.當(dāng)通過上一步的觀察，細(xì)胞初步?jīng)]有任何問題時(shí)，進(jìn)行下一步操作。當(dāng)收到的細(xì)胞密達(dá)到80%左右時(shí)，則處理如下：棄除瓶中大部分培養(yǎng)基，僅保留5到10mL培養(yǎng)所需的常規(guī)培養(yǎng)基；或更換新鮮的培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中，隨后每天觀察。細(xì)胞在低于正常生長溫度情況下，會(huì)調(diào)整為靜止期，或者慢速生長期，必須恢復(fù)37度的環(huán)境至少3個(gè)小時(shí)左右，才能重新調(diào)整到接近對數(shù)生長期的狀態(tài)，在對數(shù)生長期進(jìn)行細(xì)胞的傳代會(huì)大大增加傳代的成功率，和細(xì)胞的存活率。

       3.如果經(jīng)di一步觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞密度超過90%，并且細(xì)胞狀態(tài)很好時(shí)，則復(fù)溫后2個(gè)小時(shí)需要立即傳代。傳代的比例應(yīng)依據(jù)不同的細(xì)胞而定。對于生長比較快，狀態(tài)穩(wěn)定，不易受外界影響的細(xì)胞可以一次多傳幾瓶；對于生長較慢，細(xì)胞比較薄，狀態(tài)容易波動(dòng)的細(xì)胞類型，一次少傳些，保證每瓶細(xì)胞密度大些，便于穩(wěn)定生長。至于一些比較陌生的細(xì)胞，di一次處理也可以依照第二種情況。

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