細胞系特征

細胞株名稱：MKN45-LUC人胃癌熒光素酶標記細胞 處理方法 含STR鑒定

組織來源：人胃癌

生長特性：懸浮生長

微生物及支原體檢測：陰性

安全性：所有腫瘤和病毒轉染的細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。

培養(yǎng)條件：

*培養(yǎng)基：90%RPMI-1640+10%胎牛血清+0.1ug/ml FU

GIBCOFBS-10099-141或HYCLONEFBS-SH30084.03。

培養(yǎng)條件：37.0C  carbon dioxide(CO2),5%

傳代方法：

收到細胞后，在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。

（一）如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作，低速離心，打開細胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液（注意不要吸出細胞），換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。

(二)如果細胞已長滿，即可進行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 低速離心，棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。

2. 按6-8ml/瓶補加*培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中（補加*培養(yǎng)基至8到10ml）。如果沒有特別說明，收到細胞后的第yi次傳代一般是一傳二。

注：1、觀察細胞在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，否則不能準確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B(tài)請在10X或20X物鏡下。

2、瓶中運輸培養(yǎng)基不能重復再用,請換用加雙抗的新培養(yǎng)基，細胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。

3、有些細胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶內。

4、收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請及時與我們聯(lián)系。

凍存方法：

  凍存液：90%胎牛血清，10%DMSO

  儲存：液氮儲存

問題

原因

解決方案

細胞生長緩慢

生長培養(yǎng)基使用不當

按照生產商的建議，使用相應的預熱生長培養(yǎng)基。

生長培養(yǎng)基中血清質量差

使用其他批次血清。

傳代操作不當

按照生產商的建議消化時間及傳代比例進行操作。

換液過于頻繁

降低換液頻率，參考生產商推薦的換液頻率。

細胞傳代次數(shù)過多

使用傳代次數(shù)較少的健康細胞。

細胞生長超過匯合狀態(tài)

哺乳動物細胞傳代應在細胞處于對數(shù)期、未達到匯合狀態(tài)時進行，建議細胞密度達 80-90%傳代。

細胞被支原體污染

將細胞、培養(yǎng)基和試劑丟棄；新取一只凍存細胞，并且使用新的培養(yǎng)基和試劑。

細胞復蘇存活率低

細胞凍存不當

新取一只凍存細胞，并儲存在液氮中。將細胞儲存在液氮中，直至復蘇。

自行制備的凍存細胞無活性

將細胞按照生產商推薦的密度凍存。

制備凍存細胞時使用傳代次數(shù)少的細胞。

嚴格按照生產商推薦的操作程序凍存細胞。請注意本手冊推薦的冷凍程序是凍存細胞的一般流程，只能作為指導原則使用。

新取一只凍存細胞。

細胞復蘇方法不當

嚴格按照生產商推薦的操作程序復蘇細胞。請注意本手冊推薦的解凍程序是復蘇細胞的一般流程，只能作為指導原則使用。

確保冷凍細胞解凍迅速，接種前用預熱的生長培養(yǎng)基緩慢稀釋細胞。

復蘇培養(yǎng)基使用不當

使用生產商推薦的培養(yǎng)基。確保培養(yǎng)基使用前已經預熱。

細胞稀釋過度

按照生產商的建議，將解凍后的細胞高密度接種，以改善復蘇效果。

處理細胞時動作不夠輕柔

凍存和復蘇過程對大多數(shù)細胞都會造成不利影 響。不要通過渦旋振蕩或者用力敲打培養(yǎng)瓶的方法使細胞脫落(培養(yǎng)昆蟲細胞時除外)，也不要高速離心細胞。

凍存液中所用保護劑在儲存過程中未避光

如果未避光儲存，凍存保護劑會轉變?yōu)閷毎卸拘缘奈镔|；新取一只凍存保護劑，重新凍存細胞。