SK-HEP-1-LUC人肝癌熒光素酶標記細胞 培養(yǎng)步驟

溫馨提醒：

1、可將培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管中，備用；細胞*傳代時，可以將該培養(yǎng)基按照一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合使用，讓細胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。

2、確認細胞狀態(tài)良好后，應(yīng)及時將部分細胞凍存，再進行后續(xù)的實驗，避免后期實驗失誤可能發(fā)生細胞污染或死亡而導(dǎo)致的細胞丟失，影響后續(xù)實驗。

3、建議客戶收到細胞后前3天，100X、200X、400X各拍3張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于后續(xù)和技術(shù)支持溝通交流。

SK-HEP-1-LUC人肝癌熒光素酶標記細胞 培養(yǎng)常見問題

問題1：培養(yǎng)液pH 值變化太快

SK-Hep-1(人肝癌細胞)說明書細胞結(jié)構(gòu)：

SK-Hep-1(人肝癌細胞)說明書可能原因

（1）CO2 張力不對

（2）培養(yǎng)瓶蓋擰得太緊

（3）NaHCO3 緩沖系統(tǒng)緩沖力不足

（4）培養(yǎng)液中鹽濃度不正確

（5）細菌、酵母或真菌污染

建議解決方法

（1）按培養(yǎng)液中NaHCO3 濃度增加或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2 濃度，2.0g/L 到3.7g/L 濃度NaHCO3 對應(yīng)CO2 濃度為5％ 到10％。

（2）松開瓶蓋1/4 圈。

（3）改用不依賴CO2 培養(yǎng)液。加HEPES 緩沖液至10 到25mM 終濃度。

（4）5637(人膀胱癌細胞)在CO2 培養(yǎng)環(huán)境中改用基于Earle′s 鹽配制的培養(yǎng)液，在大氣培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)改用Hanks 鹽配制的培養(yǎng)液。

（5）丟棄培養(yǎng)物，或用抗生素除菌。

問題2：培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀，但pH值不變

SK-Hep-1(人肝癌細胞)說明書可能原因

（1）洗滌劑清洗后殘留有磷酸鹽，將培養(yǎng)基成分沉淀下來

（2）冰凍保存培養(yǎng)液

建議解決方法

（1）用去離子水反復(fù)沖洗玻璃器皿，然后滅菌。

（2）將培養(yǎng)液加熱到37℃，搖動使其溶解如沉淀仍然存在，丟棄培養(yǎng)液。

問題3：培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀， 同時pH 發(fā)生變化

可能原因

細菌或真菌污染

建議解決方法

丟棄培養(yǎng)物，或用抗生素除菌。

SK-Hep-1(人肝癌細胞)說明書如何處理？

1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。

2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。

4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。

5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。

6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。