Fast T4 DNA Ligase，讓片段連接更高效

——快速高效的DNA連接酶

產(chǎn)品原理

DNA 連接酶是一種能夠催化相鄰DNA 的3’-OH 和5’- 磷酸基末段形成磷酸二酯鍵，并且把兩段DNA 拼接起來的核酸酶。T4 Ligase是目前應(yīng)用比較多的病毒基因組編碼的DNA 連接酶，主要從缺失型嗜菌體中提取，噬菌體T4 的30 基因是該酶的合成基因。T4 DNA連接酶在分子生物學(xué)中有廣泛的應(yīng)用。

產(chǎn)品簡介

在普通T4 DNA連接酶的基礎(chǔ)上，利用定向改造技術(shù)，將T4 DNA ligase的有效催化活性結(jié)構(gòu)域通過多輪突變篩選，得到一種連接活性更強(qiáng)的突變體。采用zui高純度的生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)和嚴(yán)格的質(zhì)量檢測，有效去除核酸酶、切口酶的殘留，連接時(shí)間只需15min，打造一款快速高效的DNA連接酶。

產(chǎn)品應(yīng)用

產(chǎn)品特點(diǎn)

1. 應(yīng)用更廣泛：可催化粘性末端和平末端形成磷酸二脂鍵

2. 適用于多種樣本：包括FFPE、cfDNA等在內(nèi)的所有樣本均能高效連接

3. 適用于多種類型片段連接：兼容illumina平臺(tái)Y型接頭以及MGI平臺(tái)Bubble接頭

4. 嚴(yán)格質(zhì)控：嚴(yán)格的批次性能與穩(wěn)定性質(zhì)控

原料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

核酸內(nèi)切酶殘留質(zhì)控：2000 U的本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74℃下反應(yīng)1小時(shí)，DNA電泳譜帶不發(fā)生變化。

核酸外切酶殘留質(zhì)控：2000 U的本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74℃下反應(yīng)1小時(shí)，DNA的電泳譜帶不發(fā)生變化。

連接效率測評(píng)

將本產(chǎn)品用于NGS建庫接頭連接模塊，樣本為模式樣本cfDNA模擬品，加入Y型建庫接頭，連接之后經(jīng)Agilent 2100檢測，理論上會(huì)出現(xiàn)三個(gè)峰：

①雙端均未連接接頭片段；② 僅一端連接接頭片段；③ 雙端均連接接頭片段

而在二代測序文庫構(gòu)建中，只有雙端都連接接頭的片段才是合格可用的文庫，因而通?？梢酝ㄟ^雙端均連接接頭的片段占比反應(yīng)接頭連接效率。即雙端連接接頭片段占比越高，單端連接以及無接頭連接的片段占比越低，連接效率越高。

*峰指認(rèn)：①未連接接頭 ②單端連接接頭 ③雙端連接接頭

*樣本制備：使用170 bp多重PCR產(chǎn)物作為cfDNA模擬品，該P(yáng)CR產(chǎn)物經(jīng)過設(shè)計(jì)，3’端含有所有堿基的組合（共16種）。

可應(yīng)用于MGI/Illumina平臺(tái)文庫構(gòu)建中接頭連接

• 樣本類型：FFPE、cfDNA、腸道微生物

• 對(duì)比競品：N*品牌 T4 DNA Ligase

• 測序平臺(tái)：illumina^® 以及MGI^®

• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：Fast T4 DNA Ligase在不同樣本類型中的連接效率高于N*

應(yīng)用反饋

將本品應(yīng)用于NGS建庫試劑盒中（Cat#12199），經(jīng)過不同條件建庫驗(yàn)證，相比于競品K*品牌均能獲得更高的文庫產(chǎn)出。

【注】樣本來源：Calf thymus Fragment DNA

關(guān)于我們

翌圣生物成立于2014年，是致力于分子酶創(chuàng)新研發(fā)的國家高新技shu企業(yè)，總部位于上海市浦東新區(qū)醫(yī)學(xué)園區(qū)。公司圍繞“解析分子酶結(jié)構(gòu)與功能，拓展分子酶應(yīng)用場景，解決生命科學(xué)領(lǐng)域與精準(zhǔn)醫(yī)療領(lǐng)域試劑核心問題”為重點(diǎn)，開發(fā)分子生物學(xué)，高通量測序，細(xì)胞生物學(xué)及體外診斷相關(guān)的酶原料與試劑。秉承客戶至上，合作分享，誠信務(wù)實(shí)，創(chuàng)新奉獻(xiàn)的價(jià)值觀，踏實(shí)服務(wù)于生命科學(xué)以及精準(zhǔn)醫(yī)療領(lǐng)域。

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