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淺析DNA提取生物磁珠的4個(gè)關(guān)鍵參數(shù)

來(lái)源:上海希言科學(xué)儀器有限公司   2020年04月25日 17:51  
  DNA提取生物磁珠屬于生物生物磁珠的一種,其中心為氧化鐵內(nèi)核,中層包裹封閉基質(zhì),外層修飾官能團(tuán)。應(yīng)用于DNA吸附與提取純化的領(lǐng)域,具有一些重要的參數(shù)要求,如半沉降時(shí)間,磁吸時(shí)間,粒徑,比表面積,表面官能團(tuán)密度等。參數(shù)的差異不僅會(huì)導(dǎo)致操作復(fù)雜程度的不同,更會(huì)導(dǎo)致提取結(jié)果的不同,我們?cè)谶x擇DNA提取生物磁珠的時(shí)候,更要注重參數(shù)的區(qū)別,以下4種參數(shù)是選擇DNA提取生物磁珠的有效參考。
  1、懸浮性
  DNA提取生物磁珠雖然具有一定的流動(dòng)性,能夠均勻分散在液體中,跟隨液相進(jìn)入實(shí)驗(yàn)體系,但生物磁珠畢竟還是固體,會(huì)在液體中以一定速度沉降。所以DNA提取生物磁珠的半沉降時(shí)間應(yīng)在2min以上,才能保證加入生物磁珠時(shí)不會(huì)因?yàn)槌两颠^(guò)快而導(dǎo)致加入量不準(zhǔn)確,如果是多樣本的操作,對(duì)生物磁珠的半沉降時(shí)間要求應(yīng)該更高。生物磁珠良好的懸浮性,可以在操作過(guò)程中不用頻繁混勻生物磁珠,方便快捷的同時(shí)增加了實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性和均一性。
  2、磁吸時(shí)間
  DNA提取生物磁珠攜帶目的DNA與體系中雜質(zhì)分離的過(guò)程,主要是通過(guò)外加磁場(chǎng)使生物磁珠定向移動(dòng)并達(dá)到固液分離的目的,所以生物磁珠的磁吸時(shí)間會(huì)影響固液分離的時(shí)間,有些品牌的生物磁珠磁吸速度特別慢,這就影響了整體實(shí)驗(yàn)效率。DNA提取生物磁珠,磁吸時(shí)間均小于30s,適應(yīng)手動(dòng)和儀器操作進(jìn)行核酸純化的實(shí)驗(yàn)頻率。
  3、比表面積
  部分使用DNA提取生物磁珠的實(shí)驗(yàn)人員認(rèn)為粒徑越小的生物磁珠比表面積越大吸附效果也越好,這種想法并不*正確。因?yàn)樯锎胖楸砻娌⒉皇枪饣秸那蛎妫窃谥虚g基質(zhì)層有孔洞,外圍修飾集團(tuán)有凸起的,比表面積并不由粒徑大小決定,而且也并不是比表面積越大吸附效果就越好的。有研究表明,當(dāng)比表面積在60m2/g時(shí),對(duì)核酸的吸附效果較好。粒徑在300nm左右的生物磁珠包被基質(zhì)層薄內(nèi)陷孔洞少,孔容孔徑低;粒徑在1um左右的生物磁珠包被基質(zhì)層厚,表面有大量孔洞,兩者比表面積都可以達(dá)到60m2/g左右。
  4、官能基團(tuán)
  一般認(rèn)為DNA提取生物磁珠表面官能團(tuán)能越密集,對(duì)DNA的吸附效果越好,但考慮到空間位阻、電荷斥力,過(guò)高濃度使官能團(tuán)陷入生物磁珠內(nèi)部等原因,DNA提取生物磁珠的表面官能團(tuán)數(shù)量并不是越多越好的。適當(dāng)?shù)慕档蜕锎胖樯a(chǎn)過(guò)程中官能團(tuán)修飾原料,可以很好的控制DNA提取生物磁珠的粒徑和吸附量平衡。

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