產(chǎn)品名稱：SMMC-7721/DDP人肝癌順鉑耐藥株細(xì)胞 培養(yǎng)步驟 含STR鑒定

細(xì)胞污染： HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測陰性。

細(xì)胞傳代步驟： 如果細(xì)胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細(xì)胞復(fù)蘇步驟： 將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

細(xì)胞凍存步驟： 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；1．細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

SMMC-7721/DDP人肝癌順鉑耐藥株細(xì)胞 培養(yǎng)步驟 含STR鑒定

(SMMC-7721細(xì)胞)人肝癌細(xì)胞分化的特點主要可以概括成三點：

① 持久性:細(xì)胞分化貫穿于生物體整個生命進程中,在胚胎期達到*程度

② 穩(wěn)定性和不可逆性:一般來說,分化了的細(xì)胞將一直保持分化后的狀態(tài),直到死亡

③ 普遍性:生物界普遍存在,是生物個體發(fā)育的基礎(chǔ)

(SMMC-7721細(xì)胞)人肝癌細(xì)胞

培養(yǎng)條件

RPMI164010%FBS

細(xì)胞生長：貼壁生長

細(xì)胞形態(tài)：上皮樣

細(xì)胞數(shù)量：1×106個細(xì)胞數(shù)

細(xì)胞傳代：1：3傳代3~4天1次

細(xì)胞特性：取人肝癌組織采用靜置和旋轉(zhuǎn)管法培養(yǎng)11天細(xì)胞開始生長*傳代23天。AFP陽性。用Northernblot方法未能檢測到細(xì)胞中1.3kbLFIRE-1/HFREP-1mRNA的表達免疫缺陷小鼠體內(nèi)可成瘤

細(xì)胞純度：94％

細(xì)胞活力：90％（ViabilitybyTrypanBlueExclusion）

細(xì)胞檢測：細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌

細(xì)胞凍存：液氮凍存（基礎(chǔ)培養(yǎng)基+10%DMSO+20%FBS）

細(xì)胞運輸：干冰運輸（1Vial）或活細(xì)胞運輸（T-25flasks）

細(xì)胞用途：只可用于科研不可用于臨床診斷和治療

(SMMC-7721細(xì)胞)人肝癌細(xì)胞可以用大量次培養(yǎng)基培養(yǎng)，來自sciencell、ICLC、ATCC等細(xì)胞庫。從胚胎提取，于原代（或二代）凍存在液氮中，一律采用干冰運輸?？蛻羰盏郊?xì)胞后，從干冰中取出放入液氮中保存，待實驗安排好后，解凍后即可以進行復(fù)蘇培養(yǎng)。