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免疫組化實(shí)驗(yàn)決定成敗的那些小細(xì)節(jié)

來源:愛必信(上海)生物科技有限公司   2020年05月08日 11:04  

組化作為基礎(chǔ)的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn),每個(gè)小步驟中卻包含著決定成敗的技巧,這些你都知道嗎,就讓小編總結(jié)下給到你吧。

1.固定: 很好用4%的多聚甲醛固定液。對于冰凍切片,甲醛固定有時(shí)比冰凍丙酮好;但對于不同的組織和抗原,可選用不同的固定液。 有時(shí)候商品化的抗體會有比較適合而推薦的固定液,請于購置前注意說明書。

Bouin S固定液:飽和picric acid750ml,甲醛250ml,冰醋酸50ml,其對組織的穿透力較強(qiáng),固定較好,結(jié)構(gòu)完整,但因偏酸,對抗原有一定損害,且組織收縮明顯,不適于組織標(biāo)本的長期保存。

PLP液:即高碘酸鈉-賴氨酸-多聚甲醛,適于固定石蠟切片。適于富含糖類組織,對超微結(jié)構(gòu)及許多抗原的抗原性保存較好。

2.組織脫水,透明:時(shí)間不能太長,否則在切片時(shí)容易碎片,切不完整。

3.切片時(shí)展片:有些組織在切片后難以在水中展開,這時(shí)可適當(dāng)?shù)卦谒屑尤霂椎我掖肌?/p>

4.烤片:60℃ 30分鐘或37℃ 過夜,溫度太高或時(shí)間太長,抗原容易丟失。

5.蠟塊及切片的保存:在4℃保存較好

6.脫片問題:Poly-L-Lysine(多聚賴氨酸)為目前免疫組化 染色工作中常用的一種防脫片劑,6ml的多聚賴氨酸溶液可按1:10稀釋成60ml的工作液,適合于需要酶消化、微波、高溫高壓的防脫片處理。如不行,可用雙重處理(APES和Poly-L-Lysine)的切片。在以上兩種條件都行不通的情況下,可用如下方法:切片在脫蠟前,放在APES 1:50 丙酮溶液中浸泡3分鐘,晾干,即可進(jìn)行下一步。

7.滅活內(nèi)源性酶:HRP系統(tǒng):3%雙氧水滅活;AP系統(tǒng):3%HAc滅活。

8.暴露抗原:對于石蠟切片的免疫組化實(shí)驗(yàn) 時(shí),必須采用高溫加熱抗原修復(fù),這將有助于暴露抗原決定簇,從而增加免疫組化染色的強(qiáng)度(不同抗體的比較好的佳修復(fù)液請參閱抗體說明書)。對于不同的組織,不同的抗原,不同的抗體,所采用的方法應(yīng)不一樣,可進(jìn)行熱修復(fù)、胰酶消化、既不修復(fù)也不消化。膠原還可以用胃蛋白酶消化等。

9.封閉:在山羊血清封閉,非特異性染色仍然較強(qiáng)時(shí),可延長封閉時(shí)間或用濃縮血清封閉

10.抗體稀釋:應(yīng)遵循“現(xiàn)用現(xiàn)配”的原則,對于PBS稀釋的抗體一定要當(dāng)天使用。

11.背景高:在抗體濃度、反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度等合適的條件下,如果背景依舊高,可采用含1‰ Tween20的PBS洗,特別是在顯色之前要多洗。

12.返藍(lán):在蘇木素復(fù)染后,可用堿性緩沖液(如PBS)或Na2HPO4的飽和溶液返藍(lán)。

13.顯色:一定要在顯微鏡下觀察,注意控制背景。

14.在整個(gè)操作過程中,切片千萬不能干燥,否則會有非特異性染色。

 

以上就是免疫組化各個(gè)步驟中包含的需要注意的細(xì)節(jié),看完是不是對你有所啟發(fā)呢,愛必信5月*正在火熱進(jìn)行中,涵蓋多條產(chǎn)品線的比較常用試劑,2件8折,5件75折,更有可愛的玩偶相贈,也包含IHC基礎(chǔ)產(chǎn)品線產(chǎn)品,快來看看吧!


培養(yǎng)線:

  貨號  品名  規(guī)格  目錄價(jià)
  abs974   胎牛血清(標(biāo)準(zhǔn)級)  125/500mL  683/2541
  abs975   胎牛血清(標(biāo)準(zhǔn)級),輻照  125/500mL  746/2751
  abs972   胎牛血清(優(yōu)級)  125/500mL  935/3465
  abs973   胎牛血清(優(yōu)級),輻照  125/500mL  998/3675
  abs9412   Serum-Free干細(xì)胞凍存液  100mL  1943
  abs9413   Serum-Free細(xì)胞凍存液  50mL/100mL  903/1712
  abs80002   雞胚提取物  10ml  2500
  abs9119   Bovine Pituitary Extract (BPE)  10mg/25mg  1820/2700


常規(guī)常用:

  貨號  品名  規(guī)格  目錄價(jià)
  abs9187  二甲基亞砜(DMSO)(細(xì)胞培養(yǎng)級)  50ml  189
  abs955  免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒  50tests  2625
  abs957  即用型高效免疫組化二抗試劑盒  5ml  2000
  abs930  ficoll  50ml/100ml  262/420
  abs9156  牛血清白蛋白(BSA,cell culture)  50g/100g  735/1155
  abs9157  牛血清白蛋白 (BSA)  100g  525
  abs9169  Insulin, from Bovine Pancreas  25/100/500mg/1g  231/683/2604/4515
  abs42019847  Insulin(重組人胰島素)  100mg/1g  1400/9600
  abs50002  中性粒細(xì)胞呼吸爆發(fā)檢測試劑盒  25T/50T/100T  2000/3200/5000
  abs80001  霍亂毒素B亞單位  1mg  2200
  abs9118  Proteinase K  100mg/1g  188/1600
  abs9122  Surfactin  10mg  3950
  abs47014828  Hygromycin B  1g/5g/10g  750/3840/6144
  abs50001  Annexin V-FITC 凋亡檢測試劑盒  50T/100T  1050/1838
  abs920  ECL化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒  2*250ml  1155
  abs922/923/924  預(yù)染蛋白marker  500ul/5*500ul  詢價(jià)


小分子抑制劑: >>>(更多Absin品牌抑制劑現(xiàn)貨清單)>>>

 

Absin特色產(chǎn)品線:
WB相關(guān):ECL發(fā)光液、預(yù)染marker、預(yù)制膠;IHC相關(guān):二抗試劑盒、組化筆;IP/CoIP試劑盒;激動劑/抑制劑;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡試劑盒;呼吸爆發(fā)試劑盒;ELISA試劑盒;重組蛋白;抗體: 二抗、標(biāo)簽抗體、對照抗體;定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測)...

 

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