MB10067.1 v.A

   活體細(xì)胞氧化應(yīng)激活性氧超氧陰離子原位染色試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

   活體細(xì)胞氧化應(yīng)激活性氧超氧陰離子原位染色試劑是一種旨在通過硝基藍(lán)四氮唑染料，受到超氧陰離子O₂^-的還原，產(chǎn)生不溶性藍(lán)黑*素沉淀，來定性檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧族的生成和增加的*而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。可以被用于細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、衰老、代謝和營養(yǎng)學(xué)等的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，顯色清晰。

技術(shù)背景

超氧自由基陰離子（superoxide radical；O2^-）、過氧化氫（hydrogen peroxide；H2O2）、羥自由基或氫氧基（hydroxyl radical；OH^-）、過氧化基（peroxyl radical；ROO^-）、氫過氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO^-）、過氧亞硝基陰離子（peroxynitrite anion；ONOO^-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、單線態(tài)氧氣（singlet oxygen）等細(xì)胞內(nèi)活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的產(chǎn)生和增多，將導(dǎo)致細(xì)胞衰老或凋亡。染料四氮唑蘭（tetrazolium）化合物，包括硝基藍(lán)四氮唑（Nitro Blue Tetrazolium；NBT）和二甲基噻唑二苯基四唑嗅藍(lán)（3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide；MTT），一旦受到超氧陰離子O₂^-的直接還原，便產(chǎn)生不溶性甲暨色素。據(jù)此證明細(xì)胞內(nèi)超氧陰離子活性氧族的存在。 

產(chǎn)品內(nèi)容

   染色液（Reagent A）     毫升

   清理液（Reagent B）     毫升

產(chǎn)品說明書     1份

保存方式

保存   染色液（Reagent A）在－20℃冰箱里，嚴(yán)格避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保證6月

用戶自備

*細(xì)胞培養(yǎng)液（GMS12052）：用于細(xì)胞操作所需的培養(yǎng)基

細(xì)胞培養(yǎng)箱：用于細(xì)胞染色孵育

光學(xué)顯微鏡：用于觀察染色細(xì)胞

實(shí)驗(yàn)步驟

• 準(zhǔn)備好待測的細(xì)胞培養(yǎng)板的培養(yǎng)細(xì)胞
• 直至細(xì)胞鋪滿率達(dá)70％
• 小心抽掉多孔細(xì)胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液
• 小心加入適量的用戶自備的細(xì)胞培養(yǎng)液以及處理藥品到每個(gè)培養(yǎng)孔里（見下表）

• 加入適量的   染色液（Reagent A）到每個(gè)培養(yǎng)孔里（見下表）

• 輕輕搖動(dòng)細(xì)胞培養(yǎng)板，混勻
• 放進(jìn)37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱里孵育60分鐘
• 小心抽去培養(yǎng)液
• 小心加入適量的   清理液（Reagent B）（見下表）

• 小心抽去清理液
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟9和10二次
• 小心加入適量的   清理液（Reagent B）（見上表）
• 即刻置于光學(xué)顯微鏡下觀察：細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)黑色，顯示ROS增強(qiáng)
• （選擇步驟）倒置培養(yǎng)板在紙巾上，使其吸干培養(yǎng)孔里的殘存液體
• （選擇步驟）用封口膜密封培養(yǎng)板，在室溫下長時(shí)間保存
• （選擇步驟）如果重新啟封觀察，發(fā)現(xiàn)樣本干枯或收縮，只需加上適量的無離子水則可

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為100次（96孔板）操作
• 細(xì)胞培養(yǎng)操作，須無菌狀態(tài)下進(jìn)行
• 操作時(shí)，須戴手套
• 孵育時(shí)，須避免光照
• 建議96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中每孔待測細(xì)胞密度為10⁴細(xì)胞
• 細(xì)胞染色前后的清洗過程中，小心操作，以免將細(xì)胞沖洗掉
• 本產(chǎn)品適合載玻片，載玻片培養(yǎng)皿，35mm培養(yǎng)皿等操作，按照6孔細(xì)胞培養(yǎng)板用量操作
• 如果超氧陰離子活性氧濃度過低，可以延長孵育時(shí)間至4小時(shí)
• 建議細(xì)胞染色完成后，即刻進(jìn)行細(xì)胞觀察分析
• 本公司提供系列細(xì)胞活性氧檢測試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰