在高效液相色譜的使用中，我們會(huì)發(fā)現(xiàn)很多實(shí)驗(yàn)室會(huì)面臨色譜柱頻繁損壞的問題。
除了要掌握色譜柱的清洗和再生外，其實(shí)重要的事情還是要注意如何去避免色譜柱的損壞。所以，這節(jié)課我們就來討論一下色譜柱的預(yù)防吧。
損壞的來源
首先，需要來了解一下色譜柱的損壞來源于哪些方面：
泵頭密封圈的磨損
進(jìn)樣閥轉(zhuǎn)子密封圈的磨損
析出的緩沖鹽
樣品中的復(fù)雜易吸附基質(zhì)
其實(shí)，在工作過程中大多數(shù)的顆粒物堵塞導(dǎo)致的色譜柱背壓升高問題是體現(xiàn)在柱頭堵塞。
而樣品的易吸附機(jī)制也可能會(huì)和柱前端的硅膠表面游離的硅醇基發(fā)生作用導(dǎo)致色譜柱背壓升高。
但是這種情況在較低的PH系統(tǒng)中會(huì)有所改善，因?yàn)檩^低的PH系統(tǒng)會(huì)降低硅膠表面的硅醇基發(fā)生解離。
預(yù)防措施
為了降低色譜柱的損傷問題，我建議大家在使用色譜柱時(shí)可以做一些預(yù)防。例如：
1在液相系統(tǒng)中加入在線過濾器
在線過濾器的內(nèi)部顆?？障兑话闶?.5微米，對(duì)于UHPLC會(huì)選擇0.2微米空隙的在線過濾器。這個(gè)空隙尺寸和柱頭的過濾篩板尺寸接近或者略小。
不同公司的在線過濾器
所以，在線過濾器能夠有效的阻隔來自樣品、泵頭密封墊、自動(dòng)進(jìn)樣器的轉(zhuǎn)子密封墊的顆粒物，以防止柱頭過濾篩板的堵塞。
注意：但是對(duì)于非常低死體積的液相系統(tǒng)，在線過濾器的加入可能會(huì)導(dǎo)致系統(tǒng)死體積增大峰展寬變嚴(yán)重的問題。而對(duì)于大多數(shù)的液相系統(tǒng)而言，色譜圖不會(huì)有太大變化。
2在柱子前端使用保護(hù)柱
保護(hù)柱有很多種，通用型、一體式、卡套式，但是它其實(shí)是一個(gè)和分析柱固定相相同的10-20mm的小柱子。因?yàn)樗哂泻头治鲋嗤膬?nèi)部填料，所以保護(hù)柱不僅可以阻隔顆粒物，還可以阻隔易吸附的樣品基質(zhì)組分。
不同公司的保護(hù)柱
注意：由于保護(hù)柱中可能有大量的強(qiáng)保留組分，在用強(qiáng)溶劑清洗系統(tǒng)時(shí)請(qǐng)取下保護(hù)柱，以防止這些強(qiáng)保留組分被洗脫進(jìn)分析柱。保護(hù)柱如果出現(xiàn)吸附飽和也可能會(huì)對(duì)分離效果有影響，例如圖中所示：3對(duì)樣品進(jìn)行凈化處理
有一些液相的分析方法沒有明確標(biāo)注樣品的凈化，但我希望大家在做分析時(shí)都能夠考慮樣品的凈化，常用的方案是對(duì)樣品進(jìn)行過濾。
色譜柱的儲(chǔ)存
在實(shí)際工作中，色譜柱的儲(chǔ)存也會(huì)影響柱子的使用壽命。那么對(duì)于色譜柱的儲(chǔ)存，也有以下建議：
短期儲(chǔ)存時(shí)
應(yīng)該保存在常用的流動(dòng)相條件下。并且，一定要移除系統(tǒng)中的緩沖鹽、酸等。
長(zhǎng)期儲(chǔ)存時(shí)
將色譜柱按照說明書的要求保存在對(duì)應(yīng)的溶劑中，并且將色譜柱從系統(tǒng)中取下兩頭用堵頭堵死。
希望今天的文章，能夠?qū)Υ蠹以谏V柱使用時(shí)延長(zhǎng)柱壽命有所幫助！