L1210/DDP小鼠白血病順鉑耐藥株 處理方法 含 STR鑒定

【背景資料】 見細胞說明書
【產(chǎn)品來源】 細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國內(nèi)外著名大學(xué)建系
"公司提供貼壁、半貼壁、懸浮、半懸浮、貼壁與懸浮混合等細胞特性，一般細胞培養(yǎng)PBS量是10%，如果出現(xiàn)細胞狀態(tài)不良情況，可以提高PBS量到15%，SHEE人永生化食管上皮細胞待細胞穩(wěn)定后，調(diào)回PBS量10%，對于初次實驗者，一般細胞培養(yǎng)，都需要加入雙抗防止細胞污染，細胞匯合度達到90%，我們開始寄送，這樣可以保持細胞收到時，良好的細胞活力。

一、售前
         上海琛藝實業(yè)專業(yè)為國內(nèi)科研提供高品質(zhì)細胞和優(yōu)質(zhì)服務(wù)，QC檢測合格后發(fā)貨保證細胞狀態(tài)良好，發(fā)貨前保證質(zhì)量。
 
二、售后
         收到細胞7天內(nèi)出現(xiàn)狀態(tài)不佳等情況請及時反饋，會有技術(shù)同步指導(dǎo)操作協(xié)助解決，如仍未養(yǎng)活免費重發(fā)。建議及時保種，有備無患！
 
三、細胞生長條件：
培養(yǎng)條件   
GIBCO(培養(yǎng)基90% +10%FBS)
溫度                   
                    37℃
空氣條件  
5% CO2，,95% AIR
傳代方法
1:2傳代，2~3天換液
凍存條件
90%FBS+10%DMSO
 
四、細胞收到后處理
    細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿*培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)暮棉k法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，嚴格無菌操作。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的*培養(yǎng)液移入廢液缸中，原瓶（T25瓶）保留6-8ml*培養(yǎng)液，懸浮細胞需離心處理，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

L1210/DDP小鼠白血病順鉑耐藥株 處理方法 含 STR鑒定
 
五、細胞培養(yǎng)步驟
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?cm皿中，加入約6ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
 
1、貼壁細胞，傳代參考如下：
①. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
②. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
③. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
 
④. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。操作步驟：
請收到細胞后，在倒置鏡下(在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。
（一）如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。
（二） (二)如果細胞已長滿，即可進行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：
1.棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。
2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，倒放于37℃培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，之后翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶10-30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量*培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加*培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中。
如果沒有特別說明，收到細胞后的*次傳代一般是一傳二。

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