小鼠TNF-α高敏標(biāo)準(zhǔn)品樣品收集
1.血清:全血樣品于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),收集 血液的試管應(yīng)為一次性的無(wú)熱原,無(wú)內(nèi)毒素試管。
2.血漿:抗凝劑推薦使用EDTA-Na2,樣品采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘,取上清即可 檢測(cè)。避免使用溶血,高血脂樣品。
3.組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì) 影響測(cè)量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體 積比,比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。 推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組 織細(xì)胞,可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘, 取上清檢測(cè)。
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:取細(xì)胞培養(yǎng)上清于1000×g離心20分鐘,除去雜質(zhì)及細(xì)胞碎片。取上清檢測(cè)。
5.其它生物樣品:1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè) 具體處理方法可參考:
6.樣品應(yīng)清澈透明,懸浮物應(yīng)離心去除。
7.樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可保存于4℃,若不能及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次使用量分裝,凍 存于-20℃(1個(gè)月內(nèi)檢測(cè)),或-80℃(6個(gè)月內(nèi)檢測(cè)),避免反復(fù)凍融。
8.如果您的樣品中檢測(cè)物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品zui值,請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況,做適當(dāng)倍數(shù)稀釋?zhuān)ńㄗh先 做預(yù)實(shí)驗(yàn),以確定稀釋倍數(shù))。
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