人源細(xì)胞系常規(guī)培養(yǎng)傳代流程

來源：杭州仟諾生物科技有限公司 2020年05月19日 11:15

　　人源細(xì)胞系作為體外模型而被廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究。正確數(shù)據(jù)的獲得常依賴于細(xì)胞系的特性，尤其是當(dāng)它用來替代其來源者的組織時(shí)。

　　人源細(xì)胞系常規(guī)培養(yǎng)傳代流程：

　?。?）吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細(xì)胞兩次，加2-3ml 0.25%胰酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意把握消化時(shí)間，通?？刂圃?-2min）

　?。?）注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存

　　（3）取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

　　（4）鏡下觀察消化情況，在HS505.T人淋巴結(jié)成纖維樣細(xì)胞生長特性邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)（不建議消化到細(xì)胞漂?。┤サ粢让?，加6-8ml*培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。

　　人源細(xì)胞系的培養(yǎng)注意事項(xiàng)：

　　1．傳代培養(yǎng)時(shí)要注意無菌操作并防止細(xì)胞之間的交叉污染，所有操作要盡量靠近酒精燈火焰。每次只進(jìn)行一種細(xì)胞的操作。每一種細(xì)胞使用一套器材，培養(yǎng)用液應(yīng)嚴(yán)格分開。

　　2．每天觀察細(xì)胞形態(tài)，掌握好細(xì)胞是否健康的標(biāo)準(zhǔn)：健康細(xì)胞的形態(tài)飽滿，折光性好，生長致密時(shí)即可傳代。

　　3．如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染跡象，應(yīng)立即采取措施，一般應(yīng)棄置污染的細(xì)胞，如果必須挽救，可加含有抗生素的BSS或培養(yǎng)基反復(fù)清洗，隨后培養(yǎng)基中加入較大量的抗菌素，并經(jīng)常更換培養(yǎng)基等。

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