INS-1細胞訂購基本信息：

細胞名稱：INS-1-GFP大鼠胰島綠色標記細胞 培養(yǎng)步驟 含STR鑒定

細胞別名

產(chǎn)品價格

INS-1細胞

大鼠胰島細胞瘤細胞

以為準

細胞特性
1）來源：大鼠移植胰島瘤

2）形態(tài)：貼壁生長

3）含量：>1x106 個/mL

4）污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
INS-1細胞培養(yǎng)的一般過程：
一、準備工作
1.器皿的清潔、干燥和消毒；
2.培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌；
3.無菌室或超凈臺的清潔與消毒；
4.培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試等等。
二、取材
在無菌環(huán)境下從機體取出某種組織細胞。理論上各種動物和人體組織都可用于培養(yǎng)，但幼體組織尤其是胚胎組織更易培養(yǎng)。取材時應(yīng)在無菌環(huán)境下盡快處理并培養(yǎng)。
三、培養(yǎng)
1.組織塊培養(yǎng)，直接放置于器皿底部，幾個小時后再加入培養(yǎng)基；細胞系培養(yǎng)，先行計數(shù)，按一定量接入器皿并直接加入培養(yǎng)基。細胞進入培養(yǎng)器皿后立即放入培養(yǎng)箱中，使細胞今早進入生長狀態(tài)。
2.每隔一定時間觀察細胞生長狀況、形態(tài)、有無污染、PH值以及二氧化碳濃度等等。
3.原代細胞一般有一段潛伏期，潛伏期內(nèi)細胞不分裂，但可貼壁或游走。過了潛伏期細胞便進入分裂期。細胞長滿平底之后要代傳培養(yǎng)。
四、凍存及復(fù)蘇

INS-1-GFP大鼠胰島綠色標記細胞 培養(yǎng)步驟 含STR鑒定

一般采用-196℃的液氮凍存，凍存管中加入含有保護劑的培養(yǎng)基。復(fù)蘇即從液氮中取出凍存管后，立即放入37℃的水中迅速融解，然后將INS-1細胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿中進行培養(yǎng)。
7.熒光素表達鑒定: 重組質(zhì)粒pSin-hyg-GFP/luc2（以下簡稱Gluc）轉(zhuǎn)染293T細胞：DNA定量后，使用PEI轉(zhuǎn)染Gluc至24孔板已預(yù)鋪的293T細胞中。轉(zhuǎn)染采用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染，試劑采用JetPEI (Polyplus公司)。兩管EP管中分別加入50ul生理鹽水，其中一管加入1ug量的質(zhì)粒（DNA體積=1ug/DNA濃度），輕輕震蕩混勻，再輕微離心；在另一管中加入PEI 2ul輕輕震蕩混勻，輕微離心，然后把PEI管中的溶液加入含有的質(zhì)粒管中，室溫孵育20min。將脂質(zhì)體包繞DNA的混合液加入需要轉(zhuǎn)染的24孔內(nèi)，37 ℃、5 % CO2條件下培養(yǎng)，8小時后換培養(yǎng)液。

8.報告基因檢測：Passive Lysis Agent裂解細胞，加入熒光素酶作用底物，將轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的細胞與陰性，陽性對照共同進行單報告基因檢測。

9.質(zhì)粒中抽：取1ml轉(zhuǎn)染報告基因檢測正確的菌液加入100ml氨芐抗性的LB培養(yǎng)基中搖菌過夜，使用Invitrogen試劑盒中抽，產(chǎn)物電泳鑒定，－20℃保存。