單層細胞傳代培養(yǎng)時常出現(xiàn)的問題

來源：賽諾利康生物技術(shù)（北京）有限公司 2020年06月05日 11:44

1. 細胞難脫離

• 培養(yǎng)基內(nèi)含有某些抑制成分（例如血清）使細胞解離液失活。

解決對策：在加入細胞解離液（dissociating solution）之前，先用DPBS潤洗細胞兩次或者是直接用細胞解離液潤洗細胞。

• 選用的細胞解離液太弱。

解決對策：提高酶濃度、EDTA濃度，或者使用作用更強的細胞解離液（如dispase, collagenase），或者是把細胞置于37°C孵育以提高解離液的活性。

• 細胞達到100%匯合時間太久，細胞間連接變得非常牢固，阻礙了解離液滲透到細胞與培養(yǎng)基質(zhì)接觸的界面。

解決對策：當(dāng)細胞達到大約70%-90%匯合時，即進行傳代。

2. 細胞脫離下來后聚集成團（Clumps）

• 分離過程太劇烈，導(dǎo)致細胞裂解釋放基因組DNA。原因有二：一，移液槍吹打太劇烈；第二，選用的細胞解離液太強或有毒性，導(dǎo)致pH或滲透壓異常。

解決對策：往細胞懸液內(nèi)加入一滴無菌DNAse (1 mg/ml in water)使DNA鏈斷裂。在隨后的操作中，注意溫和吹打細胞懸液，縮短孵育時間，換用弱一點的細胞解離液或者在低一點的溫度下孵育。

• 如果收集的單細胞懸液沒有立即加入培養(yǎng)基稀釋并接種到新的培養(yǎng)皿內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)，而是在室溫放置一段時間。這種情況下，細胞也有可能會聚集成團。

解決對策：將細胞懸液放置在冰上。

• 細胞懸液離心去除多余解離液時，離心太劇烈或時間過久。

解決對策：確保溫和離心，推薦使用125g離心10 min。

3. 細胞重新貼壁困難

• 細胞解離過程持續(xù)時間過長，使得存在于細胞膜上的細胞附著所必需的蛋白剝離。

• 培養(yǎng)基內(nèi)缺少足夠的血清或黏附因子（常見于無血清培養(yǎng)基）。

解決對策：往培養(yǎng)基內(nèi)添加黏附因子或者選用蛋白（collagen, poly-L-lysine, fibronectin, gelatin, etc.）包被過的培養(yǎng)容器。

• 未失活細胞解離液或者離心去除細胞解離液。

解決對策：在培養(yǎng)基內(nèi)添加額外的血清或特異性酶抑制劑（例如，大豆胰蛋白酶抑制劑）中和細胞解離液。亦或使用125g離心5min去除細胞解離液，然后使用新鮮培養(yǎng)基重懸細胞。

4. 細胞活力低

• 細胞分離過程太劇烈

解決對策：自行摸索解離時間。

• 配制細胞分離液所用的平衡鹽溶液（Balanced Salt Solution）pH或滲透壓異常。

解決對策：測量pH或滲透壓或直接換一瓶新的平衡鹽溶液。

• 在重新接種之前，單細胞懸液以非常高的細胞密度在室溫放置時間過長。

解決對策：將細胞懸液置于冰上。

• 培養(yǎng)基選擇不恰當(dāng)。

解決對策：推薦使用與原代細胞相配套的專屬培養(yǎng)基。

相關(guān)產(chǎn)品

凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負版權(quán)等法律責(zé)任。
如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。

国产精品视频一区二区三区四,亚洲av美洲av综合av,99国内精品久久久久久久,欧美电影一区二区三区电影