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A549人肺癌吉非替尼耐藥株 |A549細胞 含STR鑒定

來源:上海琛藝實業(yè)有限公司   2020年06月26日 21:29  

A549人肺癌吉非替尼耐藥株 |A549細胞  含STR鑒定

細胞特性

1) 來源:腺癌,乳腺,胸水

2) 形態(tài):上皮細胞樣

3) 含量:>1x106 個/mL

4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

A549人肺癌吉非替尼耐藥株 |A549細胞  含STR鑒定培養(yǎng)常見問題及其解決

1.如何選用特殊細胞系培養(yǎng)基?

培養(yǎng)某一類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細胞,很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長??傊?,*MEM做粘附細胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細胞培養(yǎng)是一個好的開始。

2.MCF-7+LUC人乳腺癌細胞(熒光素酶)何時須更換培養(yǎng)基?

視細胞生長密度而定, 或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時間,按時更換培養(yǎng)基即可。

3.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?

不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細胞培養(yǎng)基, 若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基, 細胞大都無法立即適應(yīng), 造成細胞無法存活。

4.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?

不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清, 在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。

5.何謂FBS, FCS, CS, HS ?

FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思, 兩者都是指胎牛血清, FCS 乃錯誤的使用字眼, 請不要再使用。CS (calf serum) 則是指小牛血清。HS (horseserum) 則是指馬血清。

6.培養(yǎng)MCF-7+LUC人乳腺癌細胞(熒光素酶)時應(yīng)使用5% 或10% CO2?或根本沒有影響?

一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO3 2-/H+ 作為pH 的緩沖系統(tǒng), 而培養(yǎng)基中NaHCO3 的含量將決定細胞培養(yǎng)時應(yīng)使用的CO2 濃度。當培養(yǎng)基中NaHCO3 含量為每公升3.7 g 時,細胞培養(yǎng)時應(yīng)使用10% CO2;當培養(yǎng)基中NaHCO3 為每公升1.5 g 時, 則應(yīng)使用5% CO2 培養(yǎng)細胞。

7.Hank's 平衡鹽溶液(HBS)要在空氣中使用,不需要CO2培養(yǎng)箱。原因是什么?Hank's 平衡鹽溶液(HBS)和Earle's平衡鹽溶液(EBS)有什么本質(zhì)的功能差別?
收到細胞后應(yīng)如何去正確的處理:

   您需要準備好細胞所要用到的培養(yǎng)基和相關(guān)試劑,雖然所有的貼壁,半貼壁或者懸浮細胞處理方式差不多,但是不同的實驗室培養(yǎng)條件和處理力度還有試劑的批間差這些問題存在,也會導(dǎo)致對細胞處理不當,或者環(huán)境的不適應(yīng)而造成細胞的死亡。

       1.收到細胞,di一時間要鏡檢:觀察細胞形態(tài)是否正常,對于貼壁細胞則要注意看貼壁情況是否很好,觀察細胞密度,有疑議及時咨提供細胞的技術(shù)人員。由于運輸?shù)臅r間或者溫度的變化,很多貼壁細胞在盛滿培養(yǎng)基的瓶子里生長的狀態(tài)和平時會有點不一樣,主要是貼壁牢固問題。比如293T,平時貼壁就不是很牢,在裝滿的培養(yǎng)基瓶子里面,會發(fā)生大片的脫落,細胞聚集在一起,但是細胞生長還是正常的,通過離心收集,加以胰酶的消化,重新打散,又可以正常的貼壁生長。

       2.當通過上一步的觀察,細胞初步?jīng)]有任何問題時,進行下一步操作。當收到的細胞密達到80%左右時,則處理如下:棄除瓶中大部分培養(yǎng)基,僅保留5到10mL培養(yǎng)所需的常規(guī)培養(yǎng)基;或更換新鮮的培養(yǎng)基,置于培養(yǎng)箱中,隨后每天觀察。細胞在低于正常生長溫度情況下,會調(diào)整為靜止期,或者慢速生長期,必須恢復(fù)37度的環(huán)境至少3個小時左右,才能重新調(diào)整到接近對數(shù)生長期的狀態(tài),在對數(shù)生長期進行細胞的傳代會大大增加傳代的成功率,和細胞的存活率。

       3.如果經(jīng)di一步觀察發(fā)現(xiàn)細胞密度超過90%,并且細胞狀態(tài)很好時,則復(fù)溫后2個小時需要立即傳代。傳代的比例應(yīng)依據(jù)不同的細胞而定。對于生長比較快,狀態(tài)穩(wěn)定,不易受外界影響的細胞可以一次多傳幾瓶;對于生長較慢,細胞比較薄,狀態(tài)容易波動的細胞類型,一次少傳些,保證每瓶細胞密度大些,便于穩(wěn)定生長。至于一些比較陌生的細胞,di一次處理也可以依照第二種情況。
HBS和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagles (2.2 g/L)中比在Hanks (0.35 g/L) 中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡,以維持溶液的PH值。Eagles液在空氣水平的CO2 中,溶液會變堿,Hanks液在CO2培養(yǎng)箱中會變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織,需要用Eagles液,。如果僅僅是清洗將要在細胞培養(yǎng)基中儲存的組織,用Hanks液就可以了。

 

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