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細(xì)胞收到后要怎樣處理?

來(lái)源:浙江聯(lián)碩生物科技有限公司   2020年06月30日 16:19  

收到細(xì)胞株包裹時(shí),請(qǐng)檢查細(xì)胞株冷凍管是否有解凍情形,若有請(qǐng)立即通知。細(xì)胞株請(qǐng)盡速開始培養(yǎng), 或立即冷凍保存(置于–70 °C,隔夜后,移到liq N2)。

冷凍細(xì)胞解凍程序:

1.根據(jù)細(xì)胞說(shuō)明書來(lái)配置培養(yǎng)基,不同的細(xì)胞株適應(yīng)的培養(yǎng)基不同,請(qǐng)務(wù)必按細(xì)胞需求來(lái)配置。

絕大多數(shù)的細(xì)胞均無(wú)法立即適應(yīng)不同的基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同的血清種類,所以當(dāng)細(xì)胞換成你們自己的培養(yǎng)基生長(zhǎng)狀態(tài)變差或者速度變緩的時(shí)候,不要著急,可以靜養(yǎng)一段時(shí)間。給細(xì)胞一個(gè)適應(yīng)的時(shí)間,不要一日看三回,操之過(guò)急;如實(shí)驗(yàn)確實(shí)緊張,可以使用中喬新舟細(xì)胞株*培養(yǎng)基,此培養(yǎng)基是按細(xì)胞精心優(yōu)化,種類豐富,適合中喬新舟任意一株細(xì)胞的培養(yǎng)。若因?qū)嶒?yàn)需要,必須有所不同時(shí), 請(qǐng)務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成,確定細(xì)胞生長(zhǎng)適應(yīng)后,方進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2.FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse serum, 馬血清),對(duì)細(xì)胞而言差異極大,請(qǐng)務(wù)必依據(jù)細(xì)胞說(shuō)明書選擇相應(yīng)的血清 ,這點(diǎn)很重要。

細(xì)胞復(fù)蘇的方法:

1.將培養(yǎng)基置于37 °C 水槽中回溫, 回溫后噴以70 % 酒精并擦拭之, 移入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。

2.取出冷凍管, 立即放入37 °C 水槽中快速解凍,水面高度不可接近或高過(guò)冷凍管之蓋沿, 否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化后,以70%ethanol擦拭冷凍管外部,移入無(wú)菌操作臺(tái)。

3.依據(jù)細(xì)胞種類和濃度,于無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)取10 ml 培養(yǎng)基加至T25 或T75 flask中。取出已解凍之細(xì)胞懸浮液,緩緩加入T25 或T75 flask 內(nèi)之培養(yǎng)基,混合均勻,放入37 °C,5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

4.對(duì)絕大多數(shù)細(xì)胞而言,1 % 以下的冷凍保護(hù)劑DMSO,不會(huì)對(duì)細(xì)胞之貼附或活化有不良影響,不需立刻由解凍的 細(xì)胞中去除,待第二天確定細(xì)胞生長(zhǎng)或貼附良好后再去除即可。

5.對(duì)極少數(shù)因?qū)MSO 敏感或會(huì)造成細(xì)胞分化之細(xì)胞,需立即去除DMSO , 去除DMSO的方法如下:可將解凍后之細(xì)胞懸浮液放入5 - 10 ml 培養(yǎng)基中,離心300 xg (約1000 rpm),5 分鐘,小心移去上清液,加入適量新鮮培養(yǎng)基,將細(xì)胞均勻混合后,轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中,再放入37 °C, 5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

活細(xì)胞的處理方式︰

1. 細(xì)胞在寄送過(guò)程中,為避免起泡造成細(xì)胞脫落死亡,T25 flask 均加滿培養(yǎng)基。收到后,請(qǐng)檢查flask 外觀,并于顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)和有無(wú)污染現(xiàn)象,若有任何問(wèn)題,不要打開蓋子,請(qǐng)立即通知我們。

2. 將原封的T25 flask細(xì)胞 靜置于細(xì)胞 培養(yǎng)箱中,讓細(xì)胞穩(wěn)定一下,并讓運(yùn)送過(guò)程中少數(shù)脫落的細(xì)胞可再附著生長(zhǎng)。2-4小時(shí)后,無(wú)菌操作箱內(nèi)取出flask內(nèi)之培養(yǎng)基,僅留約5-10ml 培養(yǎng)基于flask 內(nèi),如無(wú)需傳代,請(qǐng)置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),如細(xì)胞已達(dá)到85%以上的密度,請(qǐng)立即將細(xì)胞做傳代處理。

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