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細胞收到后要怎樣處理?

來源:浙江聯(lián)碩生物科技有限公司   2020年06月30日 16:19  

收到細胞株包裹時,請檢查細胞株冷凍管是否有解凍情形,若有請立即通知。細胞株請盡速開始培養(yǎng), 或立即冷凍保存(置于–70 °C,隔夜后,移到liq N2)。

冷凍細胞解凍程序:

1.根據(jù)細胞說明書來配置培養(yǎng)基,不同的細胞株適應(yīng)的培養(yǎng)基不同,請務(wù)必按細胞需求來配置。

絕大多數(shù)的細胞均無法立即適應(yīng)不同的基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同的血清種類,所以當(dāng)細胞換成你們自己的培養(yǎng)基生長狀態(tài)變差或者速度變緩的時候,不要著急,可以靜養(yǎng)一段時間。給細胞一個適應(yīng)的時間,不要一日看三回,操之過急;如實驗確實緊張,可以使用中喬新舟細胞株*培養(yǎng)基,此培養(yǎng)基是按細胞精心優(yōu)化,種類豐富,適合中喬新舟任意一株細胞的培養(yǎng)。若因?qū)嶒炐枰?,必須有所不同時, 請務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成,確定細胞生長適應(yīng)后,方進行實驗。

2.FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse serum, 馬血清),對細胞而言差異極大,請務(wù)必依據(jù)細胞說明書選擇相應(yīng)的血清 ,這點很重要。

細胞復(fù)蘇的方法:

1.將培養(yǎng)基置于37 °C 水槽中回溫, 回溫后噴以70 % 酒精并擦拭之, 移入無菌操作臺內(nèi)。

2.取出冷凍管, 立即放入37 °C 水槽中快速解凍,水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿, 否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化后,以70%ethanol擦拭冷凍管外部,移入無菌操作臺。

3.依據(jù)細胞種類和濃度,于無菌操作臺內(nèi)取10 ml 培養(yǎng)基加至T25 或T75 flask中。取出已解凍之細胞懸浮液,緩緩加入T25 或T75 flask 內(nèi)之培養(yǎng)基,混合均勻,放入37 °C,5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

4.對絕大多數(shù)細胞而言,1 % 以下的冷凍保護劑DMSO,不會對細胞之貼附或活化有不良影響,不需立刻由解凍的 細胞中去除,待第二天確定細胞生長或貼附良好后再去除即可。

5.對極少數(shù)因?qū)MSO 敏感或會造成細胞分化之細胞,需立即去除DMSO , 去除DMSO的方法如下:可將解凍后之細胞懸浮液放入5 - 10 ml 培養(yǎng)基中,離心300 xg (約1000 rpm),5 分鐘,小心移去上清液,加入適量新鮮培養(yǎng)基,將細胞均勻混合后,轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中,再放入37 °C, 5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

活細胞的處理方式︰

1. 細胞在寄送過程中,為避免起泡造成細胞脫落死亡,T25 flask 均加滿培養(yǎng)基。收到后,請檢查flask 外觀,并于顯微鏡下觀察細胞生長和有無污染現(xiàn)象,若有任何問題,不要打開蓋子,請立即通知我們。

2. 將原封的T25 flask細胞 靜置于細胞 培養(yǎng)箱中,讓細胞穩(wěn)定一下,并讓運送過程中少數(shù)脫落的細胞可再附著生長。2-4小時后,無菌操作箱內(nèi)取出flask內(nèi)之培養(yǎng)基,僅留約5-10ml 培養(yǎng)基于flask 內(nèi),如無需傳代,請置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),如細胞已達到85%以上的密度,請立即將細胞做傳代處理。

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