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BIU87-GFP人膀胱癌綠色標記細胞 培養(yǎng)步驟

來源:上海琛藝實業(yè)有限公司   2020年07月05日 19:32  

上海琛藝實業(yè)有限公司新增細胞庫,具有自己的研發(fā)細胞培養(yǎng)庫,上千株細胞具有STR鑒定,開學(xué)大放送,*,同時還有好禮相送,具體歡迎咨詢我們銷售人員。。。。

產(chǎn)品名稱:BIU87-GFP人膀胱癌綠色標記細胞 
·細胞數(shù)量: 1*10^6
·細胞種屬: 人源
·生長特性: 貼壁
·培養(yǎng)基: DMEM-H
·形態(tài)特征: 成纖維細胞樣
·傳代方法: 1:3傳代,2-3天傳一代
·培養(yǎng)條件: 胎牛血清至終濃度為10%。環(huán)境:空氣,95%;二氧化碳(CO2),5%;溫度,37℃
·細胞描述: 親本L的亞克隆,是早建立的連續(xù)傳代細胞之一,L細胞源自100天的雄性C3H/An小鼠的皮下網(wǎng)眼狀空隙和脂肪組織。APRT+,HPRT+。
·細胞凍存: 液氮凍存(凍存液基礎(chǔ)培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO)
·細胞運輸: 干冰運輸(2ml凍存管)或活細胞運輸(T25瓶)

細胞名稱:BIU87-GFP人膀胱癌綠色標記細胞 培養(yǎng)步驟 含STR鑒定

細胞又名: BIU87

種屬來源: 人

組織來源: 膀胱

疾病特征: 膀胱癌

細胞形態(tài): 上皮細胞樣

生長特性: 貼壁生長

培養(yǎng)基: RPMI-1640,90%;FBS,10%。

生長條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%; 溫度:37 ℃, 

傳代方法: 1:2至1:6,每周2次。

凍存條件: 90% *培養(yǎng)基+10% DMSO,液氮儲存

支原體檢測: 陰性

參考文獻:

Ye F., Chen C.-G., Qin J., Liu J., Zheng C.-Y.

Genetic profiling reveals an alarming rate of cross-contamination among human cell lines used in China.

FASEB J. 29:4268-4272(2015)

 

BIU-87人膀胱癌細胞特點和簡介

BIU-87建系于1989年,該細胞系來源于人膀胱乳頭狀移行上皮癌,通常采用5×108細胞0.2mL接種裸鼠皮下,呈進行性腫瘤生長,腫瘤結(jié)節(jié)病檢與原標本癌組織相似。22代細胞群體倍增時間為34小時。細胞能在軟瓊脂上生長,克隆形成率23%。BIU-87細胞系對ConA,WGA,PSL均有凝集反應(yīng)。

BIU-87人膀胱癌細胞接受后處理

1) 收到細胞后,請檢查是否漏液 ,如果漏液,請拍照片發(fā)給我們。

 

 2) 請先在顯微鏡下確認細胞生長 狀態(tài),去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

 

 3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加 6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。

 

 4) 如果細胞密度達80%-90%請及 時進行細胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。

 

 5) 接到細胞次日,請檢查細胞是 否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。

 

BIU87-GFP人膀胱癌綠色標記細胞 培養(yǎng)步驟 含STR鑒定 培養(yǎng)操作

1)復(fù)蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。

 

 2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。      

   

     1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

 

     2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

   

     3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

 

     4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

 

 3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;

 

    1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

 

    2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。

 

    3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

 

BIU-87人膀胱癌細胞培養(yǎng)注意事項

 1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn) 象發(fā)生請及 時和我們聯(lián)系。

 

 2. 仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關(guān)信息,如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所 需細胞因子 等,確保細胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問 題,責任由客戶自行承擔。

 

 3.   用 75%酒精擦拭細胞瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細胞會有少量 從瓶 壁脫落,將細胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察。此時多數(shù)細胞均 會貼壁,若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍 染色測定細胞活力,如果證實細胞活力正常, 請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng);如果染色結(jié)果顯示細胞無活 力,請拍下 照片及時和我們聯(lián)系,信息確認后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。

 

 4.   靜置細胞貼壁后,請將細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出,留 6~8mL 維持細胞正常培養(yǎng),待細 胞匯 合度  80%左右時正常傳代。

 

 5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用,細胞 傳代時可以 一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合,使細胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。

 

 6.   建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和 Procell 技術(shù) 部 溝通交流。由于運輸?shù)脑?,個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián) 系,告知細胞的具體情況,以便我們 的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

 

 7.該細胞僅供科研使用。

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