上海琛藝實業(yè)有限公司新增細胞庫,具有自己的研發(fā)細胞培養(yǎng)庫,上千株細胞具有STR鑒定,開學大放送,*,同時還有好禮相送,具體歡迎咨詢我們銷售人員。。。。
產(chǎn)品名稱:Capan-2-GFP細胞|人胰腺癌綠色標記細胞 培養(yǎng)步驟 含STR鑒定
·細胞數(shù)量: 1*10^6
·細胞種屬: 人源
·生長特性: 貼壁
·培養(yǎng)基: DMEM-H
·形態(tài)特征: 成纖維細胞樣
·傳代方法: 1:3傳代,2-3天傳一代
·培養(yǎng)條件: 胎牛血清至終濃度為10%。環(huán)境:空氣,95%;二氧化碳(CO2),5%;溫度,37℃
·細胞描述: 親本L的亞克隆,是早建立的連續(xù)傳代細胞之一,L細胞源自100天的雄性C3H/An小鼠的皮下網(wǎng)眼狀空隙和脂肪組織。APRT+,HPRT+。
·細胞凍存: 液氮凍存(凍存液基礎培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO)
·細胞運輸: 干冰運輸(2ml凍存管)或活細胞運輸(T25瓶)
Capan-2-GFP細胞|人胰腺癌綠色標記細胞 培養(yǎng)步驟 含STR鑒定
形態(tài)特性 上皮細胞樣
生長特性 貼壁生長
凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
細胞周期分為細胞間期和細胞分裂期,細胞間期較長,而細胞分裂期較短。
細胞間期是為細胞分裂的準備時期,表現(xiàn)為細胞增大,營養(yǎng)物質(zhì)增多。細胞分裂期則是一個細胞由兩個細胞分解為一個細胞的過程。
細胞是生命的基本單位,細胞的特殊性決定了個體的特殊性,因此,對細胞的深入研究是揭開生命奧秘、改造生命和征服疾病的關鍵。細胞生物學已經(jīng)成為當代生物科學中發(fā)展的一門學科,是生物、農(nóng)學、醫(yī)學、畜牧、水產(chǎn)和許多生物相關專業(yè)的一門必修課程。
依據(jù)細胞種類和濃度,于無菌操作臺內(nèi)取 10 ml培養(yǎng)基加至 T25或 T75 flask中。取出已解凍之細胞懸浮液,緩緩加入T25 或T75 flask 內(nèi)之培養(yǎng)基, 混 合均勻,放入37 °C,5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
培養(yǎng)步驟:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加4-6mL*培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?cm皿中),培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1、對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的*培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細胞,*脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
PS:若客戶收到2ml小管細胞,收到細胞后,用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi),嚴格無菌操作;將小管細胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿,加入5ml左右*培養(yǎng)基混勻,放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度:若密度未超過80%,換液繼續(xù)培養(yǎng),視情況傳代或者凍存。若密度超過80%,可直接進行傳代(方法同上)。
2、對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,進行離心收集,1000RPM條件下離心8-10分鐘,去除上清,按凍存數(shù)量加入血清及DMSO,凍存比例為90%FBS+10%DMSO。
操作流程
1、您收到PANC-1人胰腺癌細胞后,請按照以下方法進行操作:
取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài),然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。
2、細胞傳代:
1)細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;
3)棄上清,沉淀細胞用12ml*培養(yǎng)基重懸,然后按1:2比例進行分瓶傳代,*后放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4)待細胞*貼壁后,觀察培養(yǎng)結(jié)果,之后進行換液培養(yǎng)或傳代。
3、細胞凍存:
1)細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化,輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;
3)用適量的凍存液(FBS:DMSO=9 :1)重懸細胞,并放置于凍存管中;
4)先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃過夜,24h后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。
4、細胞復蘇:
1)從液氮中取出細胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具),快速將其置入37℃水浴中解凍,直至凍存管中無結(jié)晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁;
2)將凍存管中的細胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中, 1000rpm離心5min;
3)棄上清,沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸,接種25cm2培養(yǎng)瓶,于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4)第二天,換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
訂購說明
PANC-1人胰腺癌細胞發(fā)貨采取專業(yè)的運輸包裝,并選擇快捷的運輸方式(順豐速運或其他空運快遞)
本公司細胞引種來源:ATCC、DSMZ、ECACC、武大細胞庫、上海生化細胞所、中國科學院典型培養(yǎng)物保藏委員會等
細胞處理方法:
一、貼壁細胞
1、 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞 100X,200X 各一張)。
2、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺內(nèi)打開外包裝。
3、嚴格遵循無菌操作規(guī)范,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4、37度平衡1-2小時。
5、用移液管吸取培養(yǎng)基,到50ml離心管中,剩下細胞密度達到80%至90%可以傳代,如沒有達到添加6ml新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
6、如果肉眼檢查上清有細胞,對50ml上清進行離心收集細胞,如果細胞連片狀態(tài),棄掉上清對收集的細胞進行胰酶消化(1ml胰酶37度),接種培養(yǎng)。
二、懸浮細胞
1、接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞 100X,200X 各一張)。
2、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺內(nèi)打開外包裝。
3、嚴格遵循無菌操作規(guī)范,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4、細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒)。
5、1000rpm,5min 離心,用吸管小心吸出上清,加入培養(yǎng)基,重懸細胞。
6、將重懸好的細胞轉(zhuǎn)入六孔板或者細胞培養(yǎng)瓶種,加入新鮮培養(yǎng)基,置于 37℃,5%CO2 培養(yǎng)(大部分細胞)。
培養(yǎng)操作:細胞培養(yǎng)操作指南
細胞常見問題分析:細胞培養(yǎng)常見問題分析
細胞在發(fā)貨前進行質(zhì)檢:
1、細胞存種的活性檢測
2、細菌、真菌、霉菌污染物鏡檢
3、衣原體、支原體檢測(熒光法、培養(yǎng)法等)
產(chǎn)品質(zhì)量保證及售后:
1、 細胞為三代以內(nèi),活體。運輸過程中細胞出現(xiàn)污染和狀態(tài)不好,我們*免費重新發(fā)貨。
2、 實驗過程中若確定是客戶問題,客戶僅需支付物流和耗材費用,我們可重新發(fā)貨。其他根據(jù)情況靈活處理。
3、 產(chǎn)品使用過程中,可提供技術上的指導。
使用方法
PANC-1人胰腺癌細胞
一,燒瓶培養(yǎng)的處理程序
在培養(yǎng)瓶中接種細胞并在培養(yǎng)基中*填充培養(yǎng)基以防止運輸過程中細胞的丟失。
1、收到后,目視檢查培養(yǎng)物是否有微生物污染的宏觀證據(jù)。
使用倒置顯微鏡(配備有相位傳感器),仔細檢查是否有微生物污染的證據(jù)。還檢查以確定大多數(shù)細胞是否仍然附著在燒瓶底部?在運輸過程中,培養(yǎng)物有時被粗略地處理,并且許多細胞經(jīng)常分離并懸浮在培養(yǎng)基中(但仍然是可行的)。
2、如果細胞仍然附著,無菌去除5至10毫升的運輸介質(zhì)??梢怨?jié)省運輸媒介以重復使用。在5%℃的空氣中,在37℃下培養(yǎng)細胞,直到它們準備進行傳代培養(yǎng)BGC-823人胃腺癌細胞(低分化)沒有附著,無菌地移除燒瓶的全部內(nèi)容物,并以1000rpm離心5至10分鐘。取出運輸介質(zhì)并保存。在10毫升這種培養(yǎng)基中重新沉淀顆粒細胞并加入25厘米的燒瓶中。在空氣中5%℃下,在37℃下孵育,直至細胞準備進行傳代培養(yǎng)。
二、傳代程序
體積為75厘米的燒瓶。增加或減少其他尺寸培養(yǎng)容器所需的分離培養(yǎng)基的量。
1、去除和丟棄培養(yǎng)基。
2.用0.25%(w/v)胰蛋白酶0.53mM EDTA溶液沖洗細胞層,除去所有含有胰蛋白酶抑制劑的血清痕跡。
3.添加2.0~3.0 ml胰酶-EDTA溶液瓶中,倒置顯微鏡下觀察細胞到細胞層分散(取決于胰蛋白酶的批)。
注意:為了避免結(jié)塊,不要在擊打或搖晃瓶子時攪拌細胞,等待細胞分離。難以分離的細胞可以放置在37°C以促進擴散。
4、加入6~8毫升的完整生長培養(yǎng)基,輕輕吸液,抽吸細胞。
5、在新培養(yǎng)容器中加入適當?shù)募毎麘乙旱确衷嚇印?/span>
6、培養(yǎng)37°C培養(yǎng)基。
推薦栽培比為1:3∶1:4。
介質(zhì)更新:每周2至3次
三、冷凍保存程序
該協(xié)議使用量在75平方厘米的瓶;比例減少或增加的其他尺寸的分離介質(zhì)的培養(yǎng)容器的數(shù)量。
1、去除和丟棄培養(yǎng)基。
2。簡要沖洗細胞層0.25(w/v)trypsin0.53mm EDTA溶液去除所有痕跡血清含有胰蛋白酶抑制劑。
3。加入2至3毫升的胰蛋白酶-EDTA溶液瓶中,倒置顯微鏡下觀察細胞到細胞層是分散的(通常在1到10分鐘)。
注意:為了避免結(jié)塊,不要在擊打或搖晃瓶子時攪拌細胞,等待細胞分離。難以分離的細胞可以放置在37°C以促進擴散。
4、加入6~8毫升的完整生長培養(yǎng)基,輕輕吸液,抽吸細胞。
5。去除胰酶EDTA溶液,將細胞懸液到離心管和旋轉(zhuǎn)約5 1000rpmfor 10分鐘。
6、低溫保存培養(yǎng)液中的上清液和復蘇細胞。
7、將細胞轉(zhuǎn)移至低溫瓶,1ml/瓶。
8、低溫容器中的細胞Frozen(NalgENα5100-01)。
相關產(chǎn)品
免責聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權或有權使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權使用作品的,應在授權范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關法律責任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時,必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關權利。