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聯(lián)碩生物教您如何用酶標(biāo)記抗體法染色

來源:上海鹿森生物工程有限公司   2020年07月10日 13:44  

很多實(shí)驗新手剛剛做酶聯(lián)免疫試驗,都會有很多不了解的方面,聯(lián)碩生物將是您身邊的實(shí)驗好幫手。今天,小編在這里要和大家分享下如何運(yùn)用酶標(biāo)記抗體法染色。

酶標(biāo)記抗體法的實(shí)驗原理總體來說和熒光素標(biāo)記抗體法的原理類似,分為直接法和間接法,其原理基本相同,但敏感性不同。
一、直接法
直接法是將酶(如HRP)標(biāo)記在特異性抗體(*抗體)上,然后用酶標(biāo)記抗體直接與相應(yīng)原特異性結(jié)合,形成抗原—抗體—HRP復(fù)合物,后用酶底物DAB-H202顯色。該法的優(yōu)點(diǎn)是簡單、步驟少,省時、特異性高、非特異性染色輕:缺點(diǎn)是敏感性差,因為一個抗原決定簇只結(jié)合一個HRP分子(假設(shè)一個抗體分子與一個HRP分子結(jié)合)。另外,一種標(biāo)記抗體也只能檢測一種抗原。若要檢測多種抗原,就必須標(biāo)記每一種特異抗體,這樣既麻煩又不經(jīng)濟(jì)。目前此法很少應(yīng)用,但在單克隆抗體制備過程中,為了更特異地篩選單抗,仍常用此法。
二、間接法
間接法也稱夾心法,是直接法的簡單改進(jìn),將酶示蹤物標(biāo)記在二抗上,再與*抗體(已與相應(yīng)抗原反應(yīng)形成復(fù)合物的IgG)反應(yīng),然后進(jìn)行顯色反應(yīng)。此法要求第二抗體與特異性抗體(一抗)應(yīng)是不同種屬的動物產(chǎn)生,如特異性抗體(一抗)是兔抗人IgG,酶標(biāo)記抗體(二抗)則可以是羊抗兔抗體。
間接法與直接法比較有以下優(yōu)點(diǎn):
1、應(yīng)用面較寬,僅標(biāo)記一種二抗就可以檢測眾多相同的*抗體,例如眾多一抗為兔來源,只要標(biāo)記一種抗兔二抗就可用于所有抗兔一抗的檢測,不需要對每種特異性抗體進(jìn)行標(biāo)記;
2、敏感性增加,*抗體的工作濃度在直接法的基礎(chǔ)上進(jìn)一步稀釋;
3、可以商品化購置;
4、可以設(shè)計各種對照。

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