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LLC細(xì)胞|LLC-LUC小鼠肺癌熒光素酶標(biāo)記細(xì)胞 處理方法

來源:上海琛藝實(shí)業(yè)有限公司   2020年07月12日 14:06  

上海琛藝實(shí)業(yè)有限公司經(jīng)過數(shù)年的努力發(fā)展已迅速成為集產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn)、經(jīng)營為一體的專業(yè)化生物工程公司。公司新引進(jìn)細(xì)胞上千株,其中人的已通過STR鑒定的有幾百株,歡迎各位選購。。。。。。

 

產(chǎn)品名稱:LLC細(xì)胞|LLC-LUC小鼠肺癌熒光素酶標(biāo)記細(xì)胞 處理方法  含STR鑒定

包裝:內(nèi)層無菌自封袋;防壓泡沫盒;外層防壓保溫氣泡袋;說明書
細(xì)胞來源:ATCC、sciencell、ICLC
貨期:1-2周
運(yùn)輸方式:快遞運(yùn)輸
售后:收到細(xì)胞后12天,如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有質(zhì)量問題(如污染,死亡,快遞運(yùn)輸?shù)仍颍r(shí),應(yīng)出具書面質(zhì)量問題報(bào)告并及時(shí)通知銷售人員,我們將盡快為您解決!

  • Hepa 1-6細(xì)胞 Hepa 1-6小鼠肝癌細(xì)胞
  • 三、細(xì)胞生長條件:

 

  • 組成:

組份

數(shù)目

細(xì)胞

 1 T-25瓶

細(xì)胞說明書

一份

  • 細(xì)胞簡介:

生長特性:

貼壁生長

 

細(xì)胞來源:

從ATCC/中科院/協(xié)和醫(yī)院等地引進(jìn)

培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基:1640 +10%FBS(推薦德國BI 04-002-1A

優(yōu)等胎牛血清)

氣相:空氣95%,二氧化碳5%

溫度:37℃

培養(yǎng):

  • 貼壁細(xì)胞

1.用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒,將其平躺置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行2-3小時(shí)的緩沖,.然后置于無菌操作臺,打開瓶口,將其中的培養(yǎng)液去掉,再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基并置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),根據(jù)細(xì)胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進(jìn)行換液以及傳代;

2.待細(xì)胞長滿瓶底面積80%-90%,需要對其進(jìn)行傳代,di一次傳代比例為1:2。

3傳代步驟:將0.25%含EDTA胰酶置于37°預(yù)熱,倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,往培養(yǎng)瓶中加入1mlPBS,輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1ml預(yù)熱好的胰酶,置于37°孵育消化(di一次消化需時(shí)常取出置于顯微鏡下觀察,以顯微鏡下細(xì)胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細(xì)胞脫落為佳消化時(shí)間,記錄佳消化時(shí)間,以便于下次消化),消化好后加入1ml*培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞,使之*脫落,然后收集細(xì)胞懸液,1200rpm離心3min,棄上清,加入*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,進(jìn)行傳代。

 

二、懸浮細(xì)胞

1.用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒,然后置于無菌操作臺,打開瓶口,輕輕吹打后,將其中的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中,然后1200rpm離心3min,去上清;

2.將離心好的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T-25瓶中,并加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基,然后將其置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),根據(jù)細(xì)胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進(jìn)行換液(離心后去舊液,加入新鮮培養(yǎng)基);

3.顯微鏡觀察細(xì)胞數(shù)目比較多時(shí),對其進(jìn)行傳代,di一次傳代比例為1:2(離心后平均分成兩瓶培養(yǎng))。

 

細(xì)胞總數(shù):

1~3*106

傳代周期:

2-3天

傳代比例:

1:2~1:4

換液頻率:

2-3天

凍存液:

90%FBS+10%DMSO

 

四、注意事項(xiàng):

1 收到細(xì)胞后首先觀察T-25瓶是否有損壞漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時(shí)和我們聯(lián)系。

2 瓶中運(yùn)輸?shù)呐囵B(yǎng)液不能重復(fù)使用,請換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)

3 對于貼壁細(xì)胞,若大部分細(xì)胞漂浮,置于培養(yǎng)箱隔夜觀察,大部分漂浮細(xì)胞重新貼壁,表明細(xì)胞活力正常,繼續(xù)培養(yǎng),剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉;若大部分細(xì)胞仍然不貼壁,將漂浮的細(xì)胞離心收集,用臺盼藍(lán)染色鑒定細(xì)胞活力,并與本公司銷售人員及時(shí)聯(lián)系。

4 建議客戶收到細(xì)胞后不同倍鏡各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),如細(xì)胞狀態(tài)出現(xiàn)問題請于72h內(nèi)與本公司銷售聯(lián)系,以便于更好的幫您解決問題,超過時(shí)間我段,本公司則默認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)良好,不免費(fèi)對后續(xù)細(xì)胞狀態(tài)問題進(jìn)行售后。

 LLC細(xì)胞|LLC-LUC小鼠肺癌熒光素酶標(biāo)記細(xì)胞 處理方法  含STR鑒定

 

可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式:

 

 

 

(1)干冰運(yùn)輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇;

 

 

 

(2)存活細(xì)胞,收到后應(yīng)繼續(xù)生長,傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

 

 

 

(3)收到細(xì)胞后請拍照,3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,請及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。

 

 

 

用途:僅供科研使用。

 

LLC-luc小鼠肺癌細(xì)胞-熒光素| LLC-luc細(xì)胞

 

小鼠胚胎干細(xì)胞接收后的處理:

 

 

 

1) 收到細(xì)胞后,請檢查是否漏液,如果漏液,請拍照片發(fā)給我們。

 

 

 

2) 請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài),去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

 

 

 

3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加6ml新的*培養(yǎng)基。

 

 

 

4) 如果細(xì)胞長滿(90%以上)請及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代。

 

 

 

5) 接到細(xì)胞次日,請檢查細(xì)胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。

 

 

 

 細(xì)胞培養(yǎng)步驟

 

 

 

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

 

 

 

1) 準(zhǔn)備L-15培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。

 

 

 

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,100%。 溫度:37攝氏度。

 

 

 

3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

 

A。僅供研究之用。

 

運(yùn)輸保存:采用干冰保存運(yùn)輸。收到細(xì)胞時(shí),若干冰已經(jīng)*融化,請立即將細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng);若尚留有干冰,請立即將細(xì)胞放入液氮中保存待用,請按條件貯存細(xì)胞,切不可將細(xì)胞置于高溫環(huán)境。

 

OSKM-1小鼠誘導(dǎo)型多能干細(xì)胞一般培養(yǎng)方法:

 

1、組織塊培養(yǎng)法

 

A)按照前述方法取材,將組織剪成或切成1mm3大小的小塊,并加入少許培養(yǎng)基使組織濕潤。

 

B)將小塊均勻涂布于瓶壁,每小塊間距0.2 cm~12.5px,一般在25mL培養(yǎng)瓶(底面積為437.5px2)可接種20~30小塊為宜,小塊放置后,輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶,使瓶底朝上,然后于瓶內(nèi)加入適量培養(yǎng)基蓋好瓶塞,將瓶傾斜放置在37℃溫箱內(nèi)。

 

C)培養(yǎng)2~4小時(shí),待小塊貼附后,將培養(yǎng)瓶緩慢翻轉(zhuǎn)平放,靜置培養(yǎng),動(dòng)作要輕,嚴(yán)禁搖動(dòng)和來回振蕩,以防小鼠誘導(dǎo)型多能干細(xì)胞由于沖動(dòng)而使小塊漂起而造成培養(yǎng)失敗,若組織塊 不易貼壁可預(yù)先在瓶壁涂一薄層血清、胎汁或鼠尾膠原等。開始培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)基不宜多,以保持組織塊濕潤即可,培養(yǎng)24小時(shí)后再補(bǔ)液,培養(yǎng)初期移動(dòng)和觀察時(shí)要輕 拿輕放,開始幾天盡量不去搬動(dòng),以利貼壁和生長,培養(yǎng)3~5天時(shí)可換液,一方面補(bǔ)充營養(yǎng),一方面去除代謝產(chǎn)物和漂浮小塊所產(chǎn)生的毒性作用。

 

2、消化培養(yǎng)法

 

該方法是采用前述的消化分散法,將妨礙細(xì)胞生長的細(xì)胞間質(zhì)(包括基質(zhì)、纖維等)去除,使細(xì)胞分散形成細(xì)胞懸液,然后分瓶培養(yǎng)。

 

3、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

 

對于懸浮生長的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

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