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大鼠抑制素結合蛋白(INHBP)酶聯(lián)免疫試劑盒操作步驟

來源:上海撫生實業(yè)有限公司   2020年07月15日 14:55  

大鼠抑制素結合蛋白(INHBP)酶聯(lián)免疫試劑盒標本要求:

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

大鼠抑制素結合蛋白(INHBP)酶聯(lián)免疫試劑盒操作步驟

1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

g/ml

5號標準品

150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

30pg/ml

4號標準品

150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

15pg/ml

3號標準品

150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

7.5pg/ml

2號標準品

150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

3.75pg/ml

1號標準品

150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

 2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3。

8. 洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

 

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