【產(chǎn)品名稱】

通用名：雞傳染性法氏囊抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名：Diagnostic Kit For Antibodies To Infectious Bursal Disease Virus  (ELISA)

【包裝規(guī)格】 96T×1/盒

【預期用途】 雞傳染性法氏囊是由傳染性法氏囊病毒（Infectious Bursal Disease Virus，IBDV）引起的以破壞雞的中樞免疫器官——法氏囊為主要發(fā)病機理的病毒性傳染病，該病病毒損傷法氏囊而導致免疫抑制，使病雞對大腸桿菌、沙門氏菌、雞球蟲等病原更易感。

    本試劑盒適用于：測定雞血清中雞傳染性法氏囊病病毒抗體的相對水平。可用于評估雞群雞傳染性法氏囊病病毒疫苗免疫狀況分析。

【原    理】

    本試劑盒由預包被雞傳染性法氏囊VP2抗原的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成，應用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測雞血清或血漿中雞傳染性法氏囊病毒抗體。實驗時，在酶標板中加入對照血清和稀釋的待檢血清，經(jīng)溫育后，若樣品中含有雞傳染性法氏囊病毒的抗體，則將與酶標板上抗原結合，經(jīng)洗滌除去未結合的抗體和其他成分后；再加入酶標記物，與酶標板上抗原抗體復合物發(fā)生特異性結合；再經(jīng)洗滌除去未結合的酶結合物，在孔中加底物液，與酶標結合物反應形成藍色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關；加入終止液終止反應后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有傳染性法氏囊病毒抗體。

【試劑盒組成】

【儲存及有效期】 2～8℃保存，有效期12個月。

包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。

【適用儀器】 含450nm、630nm波長的酶標儀，37℃恒溫設備，可調(diào)微量移液器。

【樣品準備】

1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。

2. 用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40倍稀釋（如5ul血清加入195ul樣本稀釋液）稀釋的樣本混合均勻能取得較好結果。

3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋成工作洗滌液(如10ml濃縮洗滌液加入90ml的去離子水中)。

【檢驗方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。

2.取所需用量酶標板條，設陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3. 陰性對照、陽性對照孔分別加入陰性對照血清、陽性對照血清（不用稀釋）100μl；樣品孔每孔加入稀釋好的待測樣本100μL。

4.加樣后，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應30分鐘。

5.甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，后一次拍干。

6.每孔加酶標記物100μl。蓋好蓋板膜，置37℃避光反應30分鐘。

7.洗滌，同步驟5。

8.每孔依次加底物液100μl，混勻，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應10分鐘。

9.每孔加終止液50μl，充分混勻，終止后讀數(shù)。

【參考值】 實驗正常的情況下，當樣本的S/P≥0.2時判為陽性；樣品S/P值＜0.2時判為陰性

【檢驗結果的解釋】

在酶標儀上測各孔的OD值。檢測結果有效的條件是陽性對照孔的平均OD值≥0.6，陰性對照孔的平均OD值必須＜0.15；樣品中抗體存在與否，或樣本中抗體的相對水平的高低由S/P值決定，S/P值計算時按以下方式處理:

  S/P=(樣本OD450/630值-NCx(—))/（PCx(—)-NCx(—))，其中NCx(—)表示陰性對照孔平均OD450/630值，PCx(—)表示陽性對照孔平均OD450/630值。

【試驗方法的局限性】

    1．嚴重溶血、血清中纖維蛋白分離不充分、含紅血球樣本可能導致假陽性；長菌的樣本可能導致假陰性。

2．因個體差異或免疫時間長短等因素可能會出現(xiàn)個別雞只免疫疫苗后檢測結果為陰性。

3．陽性結果用于感染雞的血清學診斷以及流行病學調(diào)查時需結合其他診斷方法和臨床資料進行分析。。

【注意事項】

1．使用試劑盒之前，一定要仔細閱讀說明書。

2.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應按傳染物處理。

3.終止液具有腐蝕性，應避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。

4.酶標板從冷藏環(huán)境中取出時應恢復至室溫方可開袋，未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

5.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶，使用時需恢復至室溫以*溶解。

6.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。

7.用于檢測的樣品應保持新鮮。

8.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。

9.不同批號試劑組分不得混用。