高內涵篩選(high content screening, HCS)技術,指在保持細胞結構和功能完整性的前提下檢測被篩樣品,分析其對細胞形態(tài)、生長、分化、遷移、凋亡、代謝途徑及信號轉導等各個環(huán)節(jié)的影響,在單一實驗中獲取大量與基因、蛋白及其他細胞成分相關的信息,從而實現對化合物多靶點、多參數的同時檢測,確定其生物活性和潛在毒性的過程。這種量化的方法適用于大規(guī)模藥物篩選、藥理毒理實驗等等。以往在獲取細胞圖像時,由于被測樣品量大,而顯微鏡檢測視野小、操作繁瑣,檢測一張96孔板需要幾個小時的時間,難以滿足實驗需求。今天我們以24孔板為例為大家演示如何利用THUNDER實現高內涵快速掃描成像。
首先設定好紅綠雙色通道和曝光時間,選擇適合高內涵快速成像的ICC THUNDER方法,然后進入LAS X Navigator導航式界面。
然后點擊carrier,去選擇對應孔板的模具,那這邊我們選擇24孔板即可出現對應畫面。
那比如我們想在每個孔中做隨機10個點的多點掃描,點擊ok可出現10個位置固定的模式。
那如果想要10個點的位置不一樣,我們可以勾選random,這樣10個點的位置是隨機的。
此外,我們還可以調整點的分布,讓其更靠近中心或邊緣。比如,更靠中心一些,ok,那這樣可以看到10個點更聚集在孔的中央。
或者,我們還可以進行拼圖,比如,做一個5X5的拼圖,這樣可以看到每個孔中有一個5X5視野的拼圖。
或者可以以孔的覆蓋度來進行拼圖。比如我們選擇60%的覆蓋度,可以看到是這個樣子。
這里以5X5拼圖為例,可以看到右下角24個孔拍完總共需要的時間和數據大小。
設置完成后,點擊start進行拍攝。拍攝完成之后,可通過鼠標滾輪對每個孔的拼圖進行放大查看,也可以對任意一個孔的圖像進行查看。圖像清晰、無拼接痕跡。
以上多孔板高內涵快速成像的操作就完成了。
在操作視頻里,我們可見THUNDER可隨心所欲地控制多孔板高內涵快速成像;直觀又準確無誤的操作讓您用非常少的投入便實現從圖像采集到創(chuàng)建報告;從此,您無需在學習軟件操作上花費大量的精力,將更多的時間投入到研究中!
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