【產(chǎn)品名稱】

通用名：雞傳染性喉氣管炎病毒抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名：Test Kit for Antibodies to Avian Infectious Laryngotracheitis (ELISA)

【包裝規(guī)格】 96T×1/盒

【預(yù)期用途】雞傳染性喉氣管炎是由傳染性喉氣管炎病毒(Avian Infectious Laryngotracheitis， AILT)引起雞的一種急性、高度接觸傳染性呼吸道傳染病，本病呈世界性分布，是嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)的主要疫病之一。疫苗免疫是預(yù)防和控制雞傳染性支氣管炎發(fā)生的you效途徑，而免疫后抗體水平的高低反映實(shí)際的疫苗免疫效果，直接關(guān)系到免疫雞群對禽流感病毒的抵抗力。

    本試劑盒適用于：雞血清抗體的檢測，以確定被檢雞是否感染過雞傳染性喉氣管炎病毒或免疫雞體內(nèi)抗體水平；評估雞群感染AILT的風(fēng)險(xiǎn)程度；了解雛雞母源抗體水平，為AILT免疫程序的制定提供參考。

【原    理】

本試劑盒由預(yù)包被雞傳染性喉氣管炎病毒重組N蛋白的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用間接酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測雞血清或血漿中雞傳染性喉氣管炎病毒抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)，在酶標(biāo)板中加入對照血清和待檢血清，再加入HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)溫育后，若樣品中含有雞傳染性喉氣管炎病毒的抗體，則將與酶標(biāo)板上抗原抗體結(jié)合，經(jīng)*洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；在孔中加底物液TMB，與酶標(biāo)結(jié)合物反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有傳染性喉氣管炎病毒抗體。

【試劑盒組成】

【儲存及有效期】 2～8℃保存，有效期6個(gè)月。

包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個(gè)月。

【適用儀器】 含450nm、630nm波長的酶標(biāo)儀，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。

【樣品準(zhǔn)備】

1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。

2. 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水.

【檢驗(yàn)方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。

2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.陰性、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照50μl；樣品孔每孔加入待測樣本50μL，空白孔不加。

4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，靜置，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.甩去孔內(nèi)液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.  每孔依次加底物液A、底物液B各50μL，蓋好蓋板膜，置37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，于450nm波長處測定各孔吸光值（A值），無參比波長用空白孔調(diào)零(即所有孔吸光值減去空白孔吸光值)。

【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下，陰性對照≤0.2，陽性對照≥0.8。

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

1.C.O（臨界值）=0.25+陰性對照孔均值。

2.未曾免疫雞群：樣品A值≥C.O為陽性；樣品A值＜C.O為陰性。

3.免疫雞群：監(jiān)測并記錄樣本當(dāng)時(shí)的抗體水平，根據(jù)結(jié)果分析抗體水平的分布及雞群免疫狀態(tài)的動向。

【試驗(yàn)方法的局限性】

    該試驗(yàn)僅作為定性檢測雞血清或血漿中雞傳染性喉氣管炎病毒IgG抗體，根據(jù)A值高低可作抗體水平強(qiáng)、中、弱的粗略評估。

【注意事項(xiàng)】

1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。

3.底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。

4.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋，以防水滴凝聚在冷板條上。未用完酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

5.洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果，在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

6.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈，消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

7.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。

8.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

9.不同批號試劑組分不得混用。