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人乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞；MCF-7/Adr

(產(chǎn)品編號(hào)：QMS-h1160)

上海圻明生物科技有限公司

ShangHai QiMing BIOTECHNOLOGY CO.，LTD.

細(xì)胞特性

1） 來源：乳腺癌

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)

3） 含量：>1x106

4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5） 規(guī)格：T25 瓶或者 1mL 凍存管包裝

運(yùn)輸和保存：可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：（1）干冰運(yùn)輸，收到后 

立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇；（2）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng)，傳代達(dá)到細(xì)

胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。收到細(xì)胞后請(qǐng)拍照，

3 天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請(qǐng)及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。

細(xì)胞用途：僅供科研使用。

細(xì)胞接收后的處理：

1） 收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)

胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2） 在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí)，在低倍鏡（4 或 5X 物鏡)下進(jìn)行，能

準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?nbsp;10X 和 20×物鏡下，同時(shí)給剛收

到的細(xì)胞拍照，（10×，20×）各 2-3 張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)

胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，

75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置約 2-3h。

4） 貼壁細(xì)胞：在運(yùn)輸過程中貼壁細(xì)胞會(huì)有脫落的現(xiàn)象，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落

或者脫落后抱團(tuán)生長(zhǎng)，可將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置約 2-3h，然后抽出瓶中

的培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞 1000rpm 離心 5 分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照

說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）。

5） 懸浮細(xì)胞：T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置約 2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和

細(xì)胞 1000rpm 離心 5 分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說

明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基）。

6）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說

明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后d一次傳代建

議 1：2 傳代 。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

1）準(zhǔn)備 1640 基礎(chǔ)培養(yǎng)基，優(yōu)質(zhì)胎牛血清 10%，牛胰島素 0.01mg/mL，P/S 青

霉素-鏈霉素 1%，500ng/mL ADR。

注意：培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)液是不含藥物的，待細(xì)胞長(zhǎng)到 70-80%匯合度時(shí)，去掉

培養(yǎng)液，加含 400ng/ml 阿霉素藥物的培養(yǎng)液，放入培養(yǎng)箱，這段時(shí)間會(huì)有少部

分細(xì)胞懸浮起來，屬于正常情況，通過換液可以去掉，等細(xì)胞長(zhǎng)滿就可以消化傳代了，這時(shí)可以一直用含藥物培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞，兩代之后就可以將藥物濃 

度提高到 500ng/ml，細(xì)胞凍存時(shí)不要在培養(yǎng)基中加藥物。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37 攝氏度，培養(yǎng)箱

濕度為 70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二．細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加

入 4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)

加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)?/span>

細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢

查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培

養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部

分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止

消化。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4

分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者

瓶中。

注：d一次傳代推薦傳代比例為 1:2，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決

定。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

下面 T25 瓶為例；

1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗瓶底 1-2 次后加入 1ml 胰酶，細(xì)

胞變圓脫落后，加入 2ml *培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2．1000RPM 離心 5 分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加 DMSO 至終濃度

為 10%。加入 DMSO 后迅速混勻，按每 1ml 的數(shù)量分配到凍存管中，注意

凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于 1X106個(gè)細(xì)胞凍存。

3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，至少 2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液

氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即

與我們聯(lián)系。

2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意

防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。