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血清使用時的一些注意事項,您都知道嗎?

來源:上海聯(lián)碩生物科技有限公司   2020年10月14日 16:58  

一、儲存條件
血清一般儲存于-20℃,同時應避免反復凍融。若存放于4℃時,請勿超過一個月。

二、血清中絮狀沉淀的處理
沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白,這是正常特性,不會影響產(chǎn)品性質。
離心血清(400g,1-2分鐘)或簡單的讓其沉淀在瓶子底部,將血清小心的轉移到另一個無菌瓶里。
大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。
一般不建議采用過濾的方法除去沉淀,因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾。

三、使用濃度
一般為5-20%,常用是10%。過多血清容易使培養(yǎng)中的細胞發(fā)生變化,特別是一些二倍體的無限細胞系,迅速生長之后容易發(fā)生惡性轉化。

四、解凍方法
血清從冰箱取出后應慢慢地解凍。zh在4℃低溫冰箱里放置一天或直到*融化為止。如果時間不允許低溫解凍, 可參考以下解凍方法:   
1. 將血清從冰箱里取出后,在室溫下放置15-20分鐘。
2. 然后將血清放置在37℃水浴槽里。過高溫度會導致血清出現(xiàn)渾濁現(xiàn)象。不要讓水淹沒裝有血清的瓶子。
3. 每隔5分鐘左右適當搖晃瓶子,直到*地解凍為止。

五、熱滅活方法
加熱可以滅活補體系統(tǒng)。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究,培養(yǎng)ES細胞、平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
1. 用上述描述的方法將血清在低溫冰箱或室溫下解凍。
2. 在血清解凍時,將一個容器裝入適量的水,用于模擬裝有血清瓶子在熱處理過程中檢測瓶內(nèi)水的溫度。容器大小、質地和裝水的量zh與裝血清的瓶子相同或相似。
3. 待血清*解凍時,將含有血清的瓶子放在預熱的56℃水浴里,不要將含有血清的瓶子讓水淹沒或接近瓶子的蓋子,以免導致污染。
4. 在開始加熱處理時,要及時使用溫度計測定模擬瓶內(nèi)水的溫度。
5. 在預熱期間,每隔3-5分鐘要適當搖晃含有血清和水的瓶子,確保瓶內(nèi)液體均勻加熱。
6. 一旦模擬瓶內(nèi)的水溫達到55.8±0.5℃時,開始計時,并在此溫度范圍內(nèi)熱處理30分鐘,然后立即放在冰上冷卻。
為防止在熱處理過程中由蛋白質變性而導致的渾濁和沉淀現(xiàn)象,熱處理時應注意下列事項:
1. 不要用高于25℃以上的溫度加快解凍速度。
2. 在熱處理之前,要使血清*融解。
3. 不要使熱處理的溫度高于56.3℃
4. 熱處理時間不要長于30分鐘。
5. 在加熱過程中一定要定時搖動血清。

六、避免事項
1.避免反復凍融
長時間儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。
2.避免產(chǎn)生沉淀
解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
血清分裝時,須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一。
勿直接由-20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝結而發(fā)生沉淀。
勿將血清置于37℃太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會因此受到破壞,從而影響血清的品質。

七、建議事項
一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時,您應該在兩到三周內(nèi)使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。(100U/mL青霉素;100µg/mL鏈霉素)

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