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人多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)操作步驟

來源:上海研生實(shí)業(yè)有限公司   2020年11月05日 16:24  

人多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1. 取出試劑盒,室溫(20-25℃)放置 30 分鐘。
2. 分組:取出 96 孔板,根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 品組(6 個(gè)濃度)、空白孔、待測(cè)樣品組。 注:為減少實(shí)驗(yàn)誤差,保證準(zhǔn)確性,建議設(shè)置復(fù)孔。
3. 加樣:依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入 50ul 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中;空白對(duì)照孔加入 50ul 的蒸餾水;其余微孔中加入 50ul 的待測(cè)樣本。
4. 加酶標(biāo)溶液:標(biāo)準(zhǔn)品組、待測(cè)樣本組各孔中加入 100ul 的酶標(biāo)溶液(空白對(duì)照孔除外)。
5. 溫育:酶標(biāo)板用封板紙密封后,放入濕盒內(nèi)于 37℃恒溫孵育 1 小時(shí)。
6. 洗板:用稀釋后的洗滌液注滿每孔,靜置 15-30s,充分清洗酶標(biāo)板 5 次,用吸水紙*拍干。
7. 顯色:各孔加入顯色劑 A 液 50ul 后,再加入顯色劑 B 液 50ul。
8. 終止:25-37℃下避光反應(yīng) 10-15 分鐘,加入 50ul 終止液。 9. 讀板:在 450nm 波長(zhǎng)讀取各孔的 OD 值。 
注意事項(xiàng):
1. 實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭,避免交叉污染。
2. 加樣:加樣時(shí),要控制加樣速度,避免*孔與后一孔間的時(shí)間間隔過大,否則將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間,從而影響 實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性。
3. 孵育:嚴(yán)格按照說明書上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行。
4. 反應(yīng)時(shí)間的控制:加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化,如果顏色較深,請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。
5. 建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過高,應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
6. 建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)(即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線,試用幾個(gè)標(biāo)本),如果對(duì)本試劑盒有任何疑問,可和所購經(jīng)銷商, 如果因運(yùn)輸過程導(dǎo)致試劑盒失效,可要求調(diào)換,但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。

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