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MCF7/DDP人乳腺癌順鉑耐藥株|MCF7細胞培養(yǎng)步驟

來源:上海琛藝實業(yè)有限公司   2020年11月09日 22:29  

【背景資料】 見細胞說明書

MCF7/DDP人乳腺癌順鉑耐藥株|MCF7細胞培養(yǎng)步驟
【產(chǎn)品來源】 細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國內(nèi)外著名大學建系
"公司提供貼壁、半貼壁、懸浮、半懸浮、貼壁與懸浮混合等細胞特性,一般細胞培養(yǎng)PBS量是10%,如果出現(xiàn)細胞狀態(tài)不良情況,可以提高PBS量到15%,SHEE人永生化食管上皮細胞待細胞穩(wěn)定后,調(diào)回PBS量10%,對于初次實驗者,一般細胞培養(yǎng),都需要加入雙抗防止細胞污染,細胞匯合度達到90%,我們開始寄送,這樣可以保持細胞收到時,良好的細胞活力。


一、售前
         上海琛藝實業(yè)專業(yè)為國內(nèi)科研提供高品質(zhì)細胞和優(yōu)質(zhì)服務(wù),QC檢測合格后發(fā)貨保證細胞狀態(tài)良好,發(fā)貨前保證質(zhì)量。
 
二、售后
         收到細胞7天內(nèi)出現(xiàn)狀態(tài)不佳等情況請及時反饋,會有技術(shù)同步指導(dǎo)操作協(xié)助解決,如仍未養(yǎng)活免費重發(fā)。建議及時保種,有備無患!
 
三、細胞生長條件:
培養(yǎng)條件   
GIBCO(培養(yǎng)基90% +10%FBS)
溫度                   
                    37℃
空氣條件  
5% CO2,,95% AIR
傳代方法
1:2傳代,2~3天換液
凍存條件
90%FBS+10%DMSO
 
四、細胞收到后處理
    細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿*培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)暮棉k法。收到細胞回到自己的實驗室后,先打開外包裝,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi),嚴格無菌操作。鏡下觀察:未超過80%匯合度時,可將瓶裝的*培養(yǎng)液移入廢液缸中,原瓶(T25瓶)保留6-8ml*培養(yǎng)液,懸浮細胞需離心處理,放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng);超過80%匯合度時,根據(jù)情況傳代或者凍存,具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
 MCF7/DDP人乳腺癌順鉑耐藥株|MCF7細胞培養(yǎng)步驟
培養(yǎng)步驟:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加4-6mL*培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?cm皿中),培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
 
1、對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的*培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細胞,*脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
PS:若客戶收到2ml小管細胞,收到細胞后,用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi),嚴格無菌操作;將小管細胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿,加入5ml左右*培養(yǎng)基混勻,放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度:若密度未超過80%,換液繼續(xù)培養(yǎng),視情況傳代或者凍存。若密度超過80%,可直接進行傳代(方法同上)。
2、對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
 
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,進行離心收集,1000RPM條件下離心8-10分鐘,去除上清,按凍存數(shù)量加入血清及DMSO,凍存比例為90%FBS+10%DMSO。
 
PS:若客戶收到2ml小管細胞,收到細胞后,用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi),嚴格無菌操作;將小管細胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿,加入5ml左右*培養(yǎng)基混勻,放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度:若密度未超過80%,換液繼續(xù)培養(yǎng),視情況傳代或者凍存。若密度超過80%,可直接進行傳代(方法同上)。
 
上海琛藝是一家專業(yè)從事細胞培養(yǎng)相關(guān)產(chǎn)品的公司,擁有獨立細胞房(可隨時約定參觀),供應(yīng)胎牛血清,STR鑒定細胞,感受態(tài)細胞等,專業(yè),專注,性價比高,是您Shou選之家

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