瓊脂糖凝膠的配制是分子實驗室比較基本的操作,因此正確地操作對整個實驗來講很有必要,大體流程如下:稱量、熔膠、倒膠、拔梳。
1.稱量 我們通常所說的0.8%、1%的膠都是指的質(zhì)量體積分數(shù),即所稱取的瓊脂糖粉的質(zhì)量(g)比所加的TBE緩沖液的體積(mL)即膠的濃度。緩沖液的體積根據(jù)膠板的大小而定。如小膠板0.8%的膠需要瓊脂粉0.104g,TBE13mL。
2.熔膠 將所稱量的瓊脂粉與TBE在錐形瓶中混合,在微波爐內(nèi)反復(fù)加熱2~3次至瓊脂粉溶解并無氣泡。
3.倒膠 干凈的膠槽內(nèi)擺好梳子,往膠內(nèi)滴加1uL左右核酸染料,混勻,待冷卻至不燙手,輕輕倒入膠板內(nèi)。
4.拔梳.待大約20min后,輕輕拔掉梳子(若不好拔,可以滴加適量的TBE緩沖液)。
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