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其它源細(xì)胞原代細(xì)胞與傳代培養(yǎng)

來源:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司   2020年12月02日 12:00  

其它源細(xì)胞原代培養(yǎng):

1、取約500mg脂肪組織(自外科手術(shù)患者的皮下獲取),再將脂肪組織一次擠壓進(jìn)入準(zhǔn)備好的15m離心管中,每個(gè)離心管中的組織不超過5ml。

2、吸取緩沖液PBS7ml加入到上述裝有組織的離心管中,用吸管吹打10~20次,然后靜置1min左右,用吸管將組織下層的液體吸出。如此反復(fù)直到所吸出的液體呈透明狀,不帶有血細(xì)胞為止。

3、向有其它源細(xì)胞的試管中加入與組織量相同大約5ml左右的消化液(胰酶0.25%,I型膠原酶0.1%以1:1比例混合配制而成),將試管密封,放入37°C恒溫?fù)u床中,190r/min,震蕩消化30min。此時(shí)液面分為3層,上層為黃色油狀脂肪細(xì)胞層,中層為脂肪組織層,下層為含單個(gè)核細(xì)胞的液體;

4、吸出離心管中的下層液體移入含*培養(yǎng)基(含10%胎牛血清的高糖DMEM)的新離心管中終止消化,然后將離心管封閉,1500rpm離心10min。

5、用吸管吸取上清后去掉,加入1ml培養(yǎng)基,輕輕吹打10~20次制成細(xì)胞懸液,將各個(gè)離心管中的胞懸液收集起來,接種待用。

6、在剩余脂肪中加入新的胰酶和膠原酶,重復(fù)以上步驟繼續(xù)消化,重復(fù)2-3次,將收集到的有核細(xì)胞按照一定的密度接種到培養(yǎng)瓶中,放入37°C、5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng);

7、次換液:大約12-24小時(shí)后,觀察細(xì)胞貼壁即可進(jìn)行次換液,此后每隔3天換液,待細(xì)胞生長至融合后進(jìn)行傳代。

其它源細(xì)胞傳代培養(yǎng):

1、在超凈工作臺內(nèi)吸去培養(yǎng)瓶內(nèi)的舊培養(yǎng)基,加PBS沖洗2-3次,之后加入1-2mL消化液(0.25%胰酶和0.04% EDTA(v/v 1:1))。

2、培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行消化(3-5min),倒置顯微鏡下觀察其它源細(xì)胞形態(tài)變化,當(dāng)貼壁的脂肪干細(xì)胞胞回縮,細(xì)胞間隙不斷增大,細(xì)胞呈近球形同時(shí)有少量圓形細(xì)胞脫壁時(shí),加入等體積的培養(yǎng)基終止消化。

3、用吸管反復(fù)有序輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞(動(dòng)作要輕柔,注意不要產(chǎn)生氣泡),使細(xì)胞脫離瓶壁后呈單細(xì)胞懸液。

4、將單細(xì)胞懸液移至離心管中,離心,(1000rpm,5min),棄上清,加入*培養(yǎng)基,輕吹使之松散,按1:2傳代培養(yǎng)。

其它源細(xì)胞干細(xì)胞:

干細(xì)胞是具有自我復(fù)制和多向分化潛能的原始細(xì)胞,是生命的其它源細(xì)胞,是形成人體各種組織器官的原始細(xì)胞。干細(xì)胞技術(shù)是生物治療的前沿技術(shù),稱之為再生醫(yī)學(xué)。干細(xì)胞是具有自我復(fù)制和多向分化的原始細(xì)胞,是機(jī)體的起源細(xì)胞,是形成人體各種組織器官的原始細(xì)胞。

干細(xì)胞是一類具有自我更新能力的多潛能細(xì)胞,在一定條件下,它可以分化成多種功能細(xì)胞或組織器官,醫(yī)學(xué)界稱其為"萬用細(xì)胞"。干細(xì)胞是指尚未分化的細(xì)胞,存在于早期胚胎、胎盤及其附屬物、骨髓、外周血和成年組織中,它能夠被培養(yǎng)成肌肉、骨骼和神經(jīng)等200多種人體細(xì)胞、組織和器官。干細(xì)胞技術(shù)的作用就是:能再造一種全新的、正常的甚至更年輕的細(xì)胞、組織和器官。 

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