蛋白層析純化系統(tǒng)采用高度靈活配置的模塊化設(shè)計(jì),具有許多優(yōu)點(diǎn)來(lái)進(jìn)行快速、靈活、穩(wěn)定的純化。
硬件的所有閥門、檢測(cè)器和層析柱均面向操作者安裝,方便清楚、直觀地了解各個(gè)模塊之間的關(guān)系和樣品以及緩沖液的流路。
將樣品環(huán)上樣改進(jìn)為直接上樣,入口可實(shí)現(xiàn)系統(tǒng)和層析柱的自動(dòng)清洗。從一個(gè)純化任務(wù)轉(zhuǎn)向另一個(gè)純化任務(wù)僅僅需要幾分鐘,在保持準(zhǔn)確性和確保重復(fù)性的同時(shí),大大地節(jié)省制備時(shí)間。
蛋白層析純化系統(tǒng)緩沖液的更換方法:
雖然更換緩沖液不能提高蛋白純度,但它卻在蛋白純化方案中起著極其重要的作用。不同的蛋白純化方法需要不同pH及不同離子強(qiáng)度的緩沖液。
假如你用硫酸銨將蛋白沉淀出來(lái),毫無(wú)疑問蛋白是處在高鹽環(huán)境中,需要想辦法脫鹽,可用的方法有利用半透膜透析,通過勤換透析液體去除鹽分,此法尚可,但需幾個(gè)小時(shí),通常要過夜,也難以用予大規(guī)模純化中。
新型的設(shè)備將透析膜夾在兩個(gè)板中間,板的一側(cè)加緩沖液,另一側(cè)加需脫鹽的蛋白溶液,并在蛋白溶液一側(cè)通過泵加壓,可以使兩側(cè)溶液在數(shù)小時(shí)內(nèi)達(dá)到平衡,若增加對(duì)蛋白溶液的壓力,還可迫使水分和鹽更多通過透析膜進(jìn)入透析液達(dá)到對(duì)蛋白濃縮的目的。
也有出售的脫鹽柱,柱內(nèi)的填料是小孔徑的顆粒,蛋白分子不能進(jìn)入孔內(nèi),先于高濃度鹽離子從柱中流出,從而使二者分離。
蛋白層析純化系統(tǒng)的每一步都會(huì)造成目的蛋白的丟失,緩沖液平衡的步驟尤甚。蛋白會(huì)結(jié)合在任何它能接觸的表面上,剪切力、起泡沫和離子強(qiáng)度的快速變化很容易讓蛋白失活。
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