Bacterial Protein Extraction Kit

細(xì)菌蛋白抽提試劑盒

保存條件：Lysozyme、DNaseⅠ、Protease Inhibitor Cocktail：-20℃，其它組分：室溫

產(chǎn)品內(nèi)容

產(chǎn)品簡介

細(xì)菌蛋白抽提試劑使用溫和的非離子型去污劑，適用于大腸桿菌及昆蟲細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白提取。提取過程中不需進(jìn)行超聲破碎，有效避免了外源蛋白的污染。本產(chǎn)品可應(yīng)用于從細(xì)菌裂解液中提取可溶性蛋白。細(xì)菌蛋白抽提試劑盒在抽提試劑的基礎(chǔ)上添加了溶菌酶、DNaseⅠ和蛋白酶抑制劑混合物，可提高蛋白提取效率并減輕因DNA引起的粘稠現(xiàn)象，有效避免蛋白降解。所提取的蛋白保持了生物學(xué)活性，可進(jìn)行IP、Western blot、蛋白純化等下游操作。

注意事項(xiàng)

1．本產(chǎn)品適用于從新鮮或凍存細(xì)菌和昆蟲細(xì)胞中提取蛋白。

2．本品采用Tris緩沖系統(tǒng)，蛋白提取后的純化操作，請(qǐng)使用相同的緩沖系統(tǒng)。

3．使用本產(chǎn)品獲得的蛋白裂解液，可用BCA或Bradford法進(jìn)行蛋白定量。

4．對(duì)于特殊的菌株，如果抽提效果不理想，可在抽提蛋白前冰凍樣品。

5．根據(jù)具體情況，可在本產(chǎn)品中加入蛋白酶抑制劑、鹽、螯合劑、還原劑等。

操作步驟

● 昆蟲細(xì)胞蛋白提取

1．低速離心收集細(xì)胞。每1 ml Bacterial Protein Extraction Reagent中加入10 μl Protease Inhibitor Cocktail即為1×工作液。

2．稱量細(xì)胞濕重，按10 ml/g的量加入1×工作液。

3．重懸后，冰上孵育20分鐘（冰上放置時(shí)間應(yīng)根據(jù)細(xì)胞類型不同進(jìn)行調(diào)整）。

4．15,000×g離心15分鐘，分離可溶性蛋白。

● 細(xì)菌可溶性蛋白提取

1．5,000×g離心10分鐘，收集菌體。

2．可選步驟：每1 ml Bacterial Protein Extraction Reagent中加入1 μl DNase I（1,000 U/ml）、 2 μl Lysozyme（50 mg/ml）和10 μl Protease Inhibitor Cocktail，渦旋震蕩混勻。

3．按照每克菌體沉淀加入20 ml Bacterial Protein Extraction Reagent的比例，向菌體沉

淀中加入抽提液，充分渦旋或用移液器上下吹打直至菌體*重懸。

4．重懸后，室溫孵育10-15分鐘（放置時(shí)間應(yīng)根據(jù)細(xì)胞類型不同進(jìn)行調(diào)整）。

5．15,000×g離心5分鐘。

6．轉(zhuǎn)移上清至新的離心管中（上清中即為可溶性蛋白），進(jìn)行蛋白定量及下游實(shí)驗(yàn)。

注意：如目的蛋白以包涵體形式存在，可使用包涵體蛋白溶解液（K0007）進(jìn)行溶解或優(yōu)化表達(dá)

條件增加可溶性蛋白的表達(dá)。

常見問題

本產(chǎn)品僅供科研使用，請(qǐng)勿用于臨床診斷及其他用途

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)：