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人ELISA試劑盒原理與操作程序

來(lái)源:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司   2021年01月06日 10:37  

人ELISA試劑盒原理:

    采用競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定金黃地鼠氧化低密度脂蛋白OXLDL水平。用金黃地鼠氧化低密度脂蛋白OXLDL抗原包被微孔板,制成固相載體,實(shí)驗(yàn)時(shí)依次在微孔板中加入標(biāo)本及標(biāo)準(zhǔn)品,并加入HRP標(biāo)記的OXLDL抗體,標(biāo)本及標(biāo)準(zhǔn)品中的抗體和一定量的酶標(biāo)抗體競(jìng)爭(zhēng)與固相抗原結(jié)合。反復(fù)洗滌后加底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色,再用硫酸終止反應(yīng),轉(zhuǎn)變成黃色。標(biāo)本中抗體量越多,結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗體愈少,顏色越淺。顏色的深淺和樣品中的OXLDL含量呈負(fù)相關(guān)。采用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度(OD值),根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算測(cè)試樣品中OXLDL濃度。

人ELISA試劑盒操作程序:

    1. 棄去液體,甩干,每孔加滿稀釋后洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次,拍干。

    2. 每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。。

    3. 取出酶標(biāo)板,每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

    4.測(cè)定:以空白孔調(diào)零,在450nm波長(zhǎng)下測(cè)量各孔的吸光度值(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

    5.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的,其實(shí)際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù)。

人ELISA試劑盒技術(shù)特點(diǎn):

1準(zhǔn)確可靠,臨床雙盲對(duì)照試驗(yàn)>1000例,結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)測(cè)序法比對(duì),結(jié)果*性大于99%。

2高靈敏:可檢測(cè)低至10ng的人基因組DNA。

3快速:整個(gè)檢測(cè)流程只需3小時(shí)。

4簡(jiǎn)便:試劑盒提供預(yù)混好的試劑,使體系配置操作簡(jiǎn)便。

5防污染

6高特異性:雙重特異性組成,保證檢測(cè)結(jié)果的特異性和準(zhǔn)確性引物與DNA互補(bǔ)鏈結(jié)合必需*配對(duì),才能延伸。探針特異性與所檢測(cè)基因的PCR產(chǎn)物配對(duì),在延伸中產(chǎn)生熒光。

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