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真核表達(dá)細(xì)胞常見表達(dá)載體有哪些
真核表達(dá)細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)物在分子結(jié)構(gòu)、理化特性和生物學(xué)功能方面更接近于天然的高等生物蛋白質(zhì)分子。
原核基因表達(dá)調(diào)控與真核存在很多共同之處。但因原核生物沒有細(xì)胞核，亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)及其基因組結(jié)構(gòu)要比真核簡單得多。
1.原核基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)特點(diǎn)
?、?sigma;因子識(shí)別特異啟動(dòng)序列，不同的σ因子決定特異基因的轉(zhuǎn)錄激活，決定mRNA,rRNA和tRNA基因的轉(zhuǎn)錄。
?、瞥齻€(gè)別基因外，原核生物絕大多數(shù)基因按功能相關(guān)性成簇的串聯(lián)、密集于染色體上，共同組成一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位——操縱子。一個(gè)操縱子只含一個(gè)啟動(dòng)序列及數(shù)個(gè)可轉(zhuǎn)錄的編碼基因。
2.真核細(xì)胞結(jié)構(gòu)及基因組結(jié)構(gòu)遠(yuǎn)比原核復(fù)雜，其基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制發(fā)生在染色體活化、基因轉(zhuǎn)錄激活、轉(zhuǎn)錄后加工、翻譯及翻譯后加工等水平的調(diào)節(jié)事件也要復(fù)雜的多。
真核細(xì)胞常見表達(dá)載體：
1.pCMVp-NEO-BAN載體
特點(diǎn):該真核細(xì)胞表達(dá)載體分子量為6600堿基對(duì)，主要由CMVp啟動(dòng)子、兔β-球蛋白基因內(nèi)含子、聚腺嘌呤、氨青霉素抗性基因和抗neo基因以及pBR322骨架構(gòu)成，在大多數(shù)真核細(xì)胞內(nèi)都能高水平穩(wěn)定地表達(dá)外源目的基因。
2.pEGFP,增強(qiáng)型絳色熒光蛋白表達(dá)載體
特點(diǎn):pEGFP表達(dá)載體中含有綠色熒光蛋白，在PCMV啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)下，在真核細(xì)胞中高水平表達(dá)。載體骨架中的SV40origin使該載體在任何表達(dá)SV40T抗原的真核細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行復(fù)制。
3.pEGFT-Actin,增強(qiáng)型綠色熒光蛋白/人肌動(dòng)蛋白表達(dá)載體
特點(diǎn):pEGFP-Actin表達(dá)載體中含有綠色熒光蛋白和人胞漿β-肌動(dòng)蛋白基因，在PCMV啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)下，在真核細(xì)胞中高水平表達(dá)。載體骨架中的SV40origin使該載體在任何表達(dá)SV40T抗原的真核細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行復(fù)制。
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