引言：維生素是人和動(dòng)物為維持正常的生理功能而必需從食 物中獲得的一類微量有機(jī)物質(zhì)，在人體生長(zhǎng)、代謝、發(fā) 育過程中發(fā)揮著重要的作用，在食品、保健品及藥品 中的測(cè)定也變得越來越頻繁。維生素是個(gè)龐大的家族，目前所知的維生素就有幾十種，大致可分為脂溶性和水 溶性兩大類。高效液相色譜法作為一種快速分離、能同 時(shí)測(cè)定多種物質(zhì)的儀器分析方法，在多種維生素同時(shí)測(cè) 定方面具有*的優(yōu)勢(shì)。但是由于水溶性維生素和脂溶 性維生素性質(zhì)差異很大，所以很少將其在同一個(gè)方法里 進(jìn)行檢測(cè)。

本方法采用 Thermofisher 的針對(duì)極性化合物有特殊選擇性 的 Acclaim PolarAdvantage II C18 色譜柱，可以很有效的將 9 種水溶性維生素得到很好的保留和分離，同時(shí)能夠在大有機(jī)相存在的情況下，對(duì)脂溶性維生素得到很好的洗脫 和分離，實(shí)現(xiàn)了一個(gè)方法解決兩類性質(zhì)差異很大的維生 素的同時(shí)分離。

儀器配置 Thermo Ultimate 3000 系統(tǒng)： 泵：DGP-3600 自動(dòng)進(jìn)樣器：WPS-3000SL 柱溫箱：TCC-3000 檢測(cè)器：DAD-3000 色譜軟件：Chromeleon 7.1

測(cè)定條件 分析柱： Acclaim PolarAdvantage II C18, 4.6×250mm, 5µm, PN: 063199, SN: 001461 流動(dòng)相： A：0.025%TFA 的水；B：乙腈；C：甲醇； 梯度見表 1. 進(jìn)樣量：10µL 柱溫：室溫 檢測(cè)器波長(zhǎng)：見表 2. 

樣品處理 按照注射液凍干劑說明要求，向其中加入 5mL 超純水， 使其充分溶解，將溶解后的注射液通過 0.22 μm 尼龍濾膜 過濾后，使用超純水稀釋 10 倍，待測(cè)。

實(shí)際樣品分析 按照樣品處理方法測(cè)定了注射液樣品，測(cè)定結(jié)果如下：

討論與建議：本實(shí)驗(yàn)針對(duì)注射液的特點(diǎn)，將 9 種水溶性維生素和 3 種脂 溶性維生素放在同一個(gè)分析方法里進(jìn)行檢測(cè)，從結(jié)果中 可以看到分析結(jié)果良好。而因?yàn)樗芤褐芯S生素C不穩(wěn)定， 所以有隨著時(shí)間推移峰面積減少的現(xiàn)象，所以推薦對(duì)于 維生素 C 的分析需要現(xiàn)做現(xiàn)配樣品。 因?yàn)樗苄跃S生素比較易溶于水，而脂溶性維生素必須 溶解在有機(jī)溶劑里，而且如果有機(jī)溶劑中出現(xiàn)比較少的 水也會(huì)導(dǎo)致脂溶性維生素的析出以及影響水溶性維生素 中四水合輔羧酶、核黃素和煙酰胺的峰形，所以標(biāo)準(zhǔn)品 中分別將水溶性維生素和脂溶性維生素分開混合測(cè)量。 因?yàn)闃悠窞閮龈蓜?，且按照使用要?5mL 超純水溶解后 依然濃度很高，所以再次將樣品稀釋 10 倍后進(jìn)行分析。