尿蛋白檢測(cè)試劑盒(麗春紅比色法)說(shuō)明書(shū)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
在尿液樣本中加入蛋白沉淀劑和麗春紅S,離心,蛋白質(zhì)-染料復(fù)合物被沉淀下來(lái),將沉淀物加入堿性溶液溶解后,分光光度法檢測(cè)560nm處吸光度,計(jì)算蛋白含量。Leagene 尿蛋白檢測(cè)試劑盒(麗春紅比色法)主要用于定量檢測(cè)尿液中蛋白含量,較雙縮脲法靈敏,對(duì)白蛋白的敏感性比球蛋白要高。
產(chǎn)品組成:
規(guī)格 名稱 |
100T | 儲(chǔ)存 |
試劑(A): 磺基水楊酸溶液 | 100ml | RT 避光 |
試劑(B): 麗春紅S試劑(10×) | 10ml | RT 避光 |
試劑(C): Alkaline Buffer | 200ml | RT |
試劑(D): 蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA) | 20mg | RT |
試劑(E): 蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液 | 1.5ml | RT |
使用說(shuō)明書(shū) | 1份 |
自備材料:
- 蒸餾水
- 離心管、試管
- 比色杯、分光光度計(jì)
操作步驟(僅供參考):
- 取適量麗春紅S試劑(10×),按1:9加入蒸餾水,稀釋至1×,室溫可保存2~3個(gè)月。
- 取1ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液加入到蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA)中,充分溶解后配制成20mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液,配制后可立即使用,溶解后的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)-20℃保存。
- 取適量20mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn),稀釋至濃度分別為0、200、400、600、800、1000、1200、1600μg/ml或所需濃度。特別提示:待測(cè)蛋白溶解于什么樣的稀釋液中,蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜溶解于什么樣的稀釋液中;例如待測(cè)蛋白溶解于蔗糖中,亦取20mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶解于蔗糖中,一般也可以用0.9%NaCl或PBS作為溶解BSA稀釋液。稀釋后的蛋白標(biāo)準(zhǔn)也應(yīng)-20℃長(zhǎng)期保存。
- 制作蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線: 各取100μl上述稀釋度的蛋白標(biāo)準(zhǔn), 與測(cè)定樣本操作相同(見(jiàn)第6步) 。”0”號(hào)管空白調(diào)零,比色杯光徑1cm,560nm比色,制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。
5.半定量實(shí)驗(yàn):取3~5ml新鮮尿液轉(zhuǎn)移入小試管,滴加磺基水楊酸溶液3~4滴,形成界 面,立即觀察,如有渾濁,提示尿液中含有蛋白質(zhì),渾濁深淺表示含量多少。?
陰性(-) | 不顯渾濁 |
可疑(±) | 輕微渾濁,隱約可見(jiàn),含蛋白量約為0.05~0.2g/L |
(+) | 明顯渾濁,無(wú)顆粒出現(xiàn),含蛋白量約為0.3g/L |
(2+) | 稀薄乳樣渾濁,出現(xiàn)顆粒,,含蛋白量約為1g/L |
(3+) | 乳濁,有絮片狀沉淀,含蛋白量約為3g/L |
(4+) | 絮片狀沉淀,含蛋白量>5g/L |
6.取離心管,根據(jù)上述半定量實(shí)驗(yàn)測(cè)得的蛋白濃度按下表要求加入待測(cè)樣本和蒸餾水,再加入1ml 1×麗春紅S試劑,混勻。3500g離心10min,將上清緩緩倒出后,倒置于濾紙上數(shù)分鐘,用濾紙條吸附管壁上多余的試劑(勿觸及管低沉淀)。再加入2ml Alkaline Buffer至沉淀中,充分混合使沉淀溶解。
蛋白濃度 | 待測(cè)樣本 | 蒸餾水 |
<1g/L | 100μl | — |
1~3g/L | 50μl(測(cè)得值×2) | 50μl |
>3g/L | 10μl(測(cè)得值×10) | 90μl |
參考區(qū)間: 46.5±18.1 mg/L
注意事項(xiàng):
1.蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA)粉末溶解于蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液后,即獲得蛋白標(biāo)準(zhǔn)原液,該原液中含有防腐劑,不影響后續(xù)檢測(cè),該蛋白標(biāo)準(zhǔn)原液-20℃長(zhǎng)期保存。
2.待測(cè)蛋白溶解于什么樣的稀釋液中,蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜溶解于什么樣的稀釋液中,否者待測(cè)蛋白與蛋白標(biāo)準(zhǔn)中所含非蛋白成分不一致,有可能導(dǎo)致測(cè)定不準(zhǔn)確。
3.待測(cè)樣本蛋白含量<0.1g/L時(shí),可用1ml樣本加0.1ml麗春紅S試劑(10×),混勻,余下操作同上。
4.本試劑盒也可以用酶標(biāo)儀檢測(cè),可檢測(cè)1000T以上。
5.本法較為靈敏,較比濁法誤差小,膽紅素<4mg/L時(shí)對(duì)結(jié)果無(wú)影響,也不受室溫影響。為了加快BCA法測(cè)定蛋白濃度的速度可以適當(dāng)用微波爐加熱,但是切勿過(guò)熱。室溫保存。蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制成溶液后-20℃凍存。
6.離心沉淀后上清液必須全部去除,但不損失沉淀物,否則可影響比色結(jié)果。為了加快BCA法測(cè)定蛋白濃度的速度可以適當(dāng)用微波爐加熱,但是切勿過(guò)熱。室溫保存。蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制成溶液后-20℃凍存。
7.為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
有效期: 12個(gè)月有效。蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制成溶液后應(yīng)-20℃凍存。
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