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離心超濾管是否要預(yù)處理?

來(lái)源:上海希言科學(xué)儀器有限公司   2021年01月22日 15:20  
  離心超濾管通常不需要預(yù)處理即可使用(也有人說(shuō)用蒸餾水洗一次會(huì)好些),不過(guò)對(duì)于蛋白質(zhì)樣本處理,特別是較稀的蛋白質(zhì)溶液來(lái)說(shuō)(<10ug/mL),用超濾膜濃縮回收率常常是不定量的。雖然PES材料使非特異吸附小化,但是,某些蛋白,特別是稀的時(shí)候,會(huì)有問(wèn)題。非特異結(jié)合的程度隨著個(gè)別蛋白結(jié)構(gòu)的不同而不同。含有帶電的或者疏水結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)更易于不可逆結(jié)合到不同表面。對(duì)超濾離心管表面做鈍化預(yù)處理可降低蛋白質(zhì)在膜表面的吸附性損失,大多數(shù)情況下,在濃縮稀蛋白溶液之前預(yù)處理柱子可以提高回收率,因?yàn)槿芤嚎商顫M(mǎn)膜和表面暴露的空白蛋白吸附位點(diǎn)。鈍化的方法是預(yù)先用高容積的鈍化溶液預(yù)浸泡柱子1小時(shí)以上,蒸餾水*沖洗柱子,再用蒸餾水離心一次以*除去可能殘留在膜上的鈍化溶液。注意鈍化處理后別讓膜干了。離心超濾管如果要留待以后使用,需要加無(wú)菌蒸餾水保持膜濕潤(rùn)。常用的鈍化溶液可選擇:
  1、1%牛血清白蛋白磷酸緩沖液溶液
  2、5%十二烷基磺酸鈉蒸餾水水溶液
  3、5%Tween-20非離子活性劑蒸餾水溶液
  4、5%Triton-X 蒸餾水溶液
  5、5%聚乙二醇化合物蒸餾水溶液
  6、1%免疫球蛋白IgG磷酸緩沖液溶液
  離心超濾管因?yàn)樾枰咚匐x心,某些對(duì)剪切力或壓力誘導(dǎo)下易變性的不穩(wěn)定樣品可能不太適合。另外超濾膜上孔徑是平均孔徑,膜容易堵,對(duì)于有微小顆?;蛘咚槠臉悠?,能先用較大孔徑的離心超濾管過(guò)濾一次,再進(jìn)行下一步濃縮。

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