離心超濾管通常不需要預(yù)處理即可使用(也有人說用蒸餾水洗一次會(huì)好些),不過對于蛋白質(zhì)樣本處理,特別是較稀的蛋白質(zhì)溶液來說(<10ug/mL),用超濾膜濃縮回收率常常是不定量的。雖然PES材料使非特異吸附小化,但是,某些蛋白,特別是稀的時(shí)候,會(huì)有問題。非特異結(jié)合的程度隨著個(gè)別蛋白結(jié)構(gòu)的不同而不同。含有帶電的或者疏水結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)更易于不可逆結(jié)合到不同表面。對超濾離心管表面做鈍化預(yù)處理可降低蛋白質(zhì)在膜表面的吸附性損失,大多數(shù)情況下,在濃縮稀蛋白溶液之前預(yù)處理柱子可以提高回收率,因?yàn)槿芤嚎商顫M膜和表面暴露的空白蛋白吸附位點(diǎn)。鈍化的方法是預(yù)先用高容積的鈍化溶液預(yù)浸泡柱子1小時(shí)以上,蒸餾水*沖洗柱子,再用蒸餾水離心一次以*除去可能殘留在膜上的鈍化溶液。注意鈍化處理后別讓膜干了。離心超濾管如果要留待以后使用,需要加無菌蒸餾水保持膜濕潤。常用的鈍化溶液可選擇:
1、1%牛血清白蛋白磷酸緩沖液溶液
2、5%十二烷基磺酸鈉蒸餾水水溶液
3、5%Tween-20非離子活性劑蒸餾水溶液
4、5%Triton-X 蒸餾水溶液
5、5%聚乙二醇化合物蒸餾水溶液
6、1%免疫球蛋白IgG磷酸緩沖液溶液
離心超濾管因?yàn)樾枰咚匐x心,某些對剪切力或壓力誘導(dǎo)下易變性的不穩(wěn)定樣品可能不太適合。另外超濾膜上孔徑是平均孔徑,膜容易堵,對于有微小顆?;蛘咚槠臉悠罚芟扔幂^大孔徑的離心超濾管過濾一次,再進(jìn)行下一步濃縮。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對其真實(shí)性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。