absin細(xì)胞培養(yǎng)常用生化試劑有:PBS,Hank’s液,D-Hank’s液,EDTA,胰蛋白酶,青霉素、鏈霉素。
磷酸鹽是生物化學(xué)研究中使用廣泛的一種緩沖劑,由於它們是二級解離,有二個pKa值,所以用它們配 制的緩沖液,pH范圍較寬:
2、Hank’s緩沖液 Hank’s液是常見的平衡鹽溶液(BSS)之一。D-Hank’s液則是無鈣鎂離子的Hank’s液(也有資料認(rèn)為除了 不含鈣鎂離子之外也不含葡萄糖)。BSS與細(xì)胞生長狀態(tài)下的pH值、滲透壓及無菌狀態(tài)一致,且配方簡單 ,是組織培養(yǎng)基本用液,常用于配制培養(yǎng)基及其他用液,或洗細(xì)胞等,細(xì)胞在這種BSS中可生存幾個小時。 3、Hank’s與磷酸鹽緩沖液的應(yīng)用 PBS:磷酸緩沖鹽溶液——具有pH緩沖作用的等滲鹽溶液。多用于非活體。
4、其他細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑 酸鹽緩沖系統(tǒng):一般細(xì)胞培養(yǎng)液的pH在7.0-7.4之間。由于碳酸鹽pH緩沖系統(tǒng)是一種生理pH緩沖系統(tǒng),大多 數(shù)培養(yǎng)液用它來保持穩(wěn)定的pH。為了維持穩(wěn)定的pH,培養(yǎng)箱中的二氧化碳需要維持在2-10%之間,以保持 培養(yǎng)液中溶解的二氧化碳的濃度。 EDTA:常用的陽離子螯合劑。組織細(xì)胞間存在鈣黏蛋白(一類Ca2+依賴的細(xì)胞黏著糖蛋白)。而EDTA可 以通過螯合金屬離子,破壞Ca2+或Mg2+依賴性的細(xì)胞黏著。 胰蛋白酶:水解細(xì)胞間的蛋白質(zhì),方便形成細(xì)胞懸液。消化細(xì)胞時可以只使用胰蛋白酶,也可以胰蛋白酶與 EDTA同時使用。胰蛋白酶的消化作用可以通過加入血清終止。EDTA的作用可以通過加入Hank’s液終止。 青霉素與鏈霉素一般合稱雙抗,青霉素主要對革蘭氏陽性菌有效。鏈霉素對許多革蘭陰性桿菌作用良好。
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